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浅论乙肝表面抗原

【摘要】目的：探讨乙肝表面抗原-CD40L胞外段融合蛋白设计的合理性。方法:应用GeneConstructionkit、DNAStar软件和网站提供的分析方案分析重组体的开放读框以及融合蛋白的柔性、亲水性、抗原性、表位等性质，并作了二级结构模拟分析。结果:重组体CMV启动子下游有完整的目的基因ORF，融合蛋白二级结构水平未出现新的抗原性及表位，亲水性无改变，Linker部位抗原性低，呈中性且柔性高，不影响两端的蛋白质二级结构及融合蛋白空间构象。结论:重组体设计合理，融合蛋白很大可能保留了乙肝表面抗原和CD40L胞外段的生物学活性，为进一步研究提供了理论依据。

【关键词】乙型肝炎病毒表面抗原CD40配体分子结构预测

Abstract:Objective:ToexplorethereasonabilityofthedesignofHBsAg-ecdCD40Lfusionprotein.Methods:Usingsequenceanalysissoftwareandprotocolsprescribedonwebsitetheopenreadingframeoftherecombinantplasmidandtheflexibility，hydrophilicity，antigenicityandepitopeofrecombinantHBsAg-ecdCD40LwereanalyzedandthesecondarystructureofHBsAg-ecdCD40Lfusionproteinwasanalyzed，too.Results:ThefusionproteinhadcorrectdomainsofHBsAgandecdCD40L.Thelinkerhadlowantigencityandhighflexibilityandmightnotinfluencethesecondarystructureofthefusionprotein.Conclusion:Thedesignofthefusionproteinisreasonable.ItKeepsthemaximumbiologicalactivitiesofHBsAgandecdCD40L.

Keywords:hepatitisBsurfaceantigens；CD40ligand；molecularstructureprediction

目前，乙肝治疗性疫苗的研究多是在乙肝表面抗原基础上进行改造，提高HBsAg的免疫原性是关键，融合适当的免疫调节因子是有效方法之一。CD40L胞外段能与DC表面CD40分子结合，促进DC成熟，诱导特异性免疫反应，与HBsAg融合后有望提高其免疫原性。在本实验中，我们设计了HBVS-ecdCD40L融合基因，重组基因能否有效转录、表达融合蛋白，融合蛋白能否保持原有的生物活性对进一步的研究至关重要，为此，我们利用核酸、蛋白质分析软件以及互联网上提供的方案，分析重组体的开放读框及融合蛋白的生物活性，预测融合蛋白设计的合理性。

1材料和方法

材料ayw亚型HBVS基因序列，人CD40L胞外段基因序列，质粒序列，连接链氨基酸序列为GGGGSGGGGSGGGGS。

引物设计为避免融合蛋白中HBsAg、CD40L胞外段两个肽段互相干扰，改变两者的性质功能，在两个基因间设计一段Linker，将HBVS基因与CD40L胞外段基因序列相连，根据GeneBank中HBVS基因、CD40L基因序列以及Linker的编码序列进行引物设计，并引入酶切位点。HBVS基因引物顺序为上游：5’-GCGGGTACCATGGA

GAACATCACATCAGGATTC-3’，引入了KpnI酶切位点，下游：5’-GGAGAATTCCACCGCCCGAGCCACCGCCACCAATGTATACCCAAAGACAAAAGAAAAT-3’，引入了EcoRI酶切位点以及Linker上半段。CD40L胞外段引物顺序为上游：5’-TTAGAATTCGTGGGTCGGGTGGCGGCGGATCTCTTCATAGAAGGTTGGACAAGATAGAA-3’，引入了EcoRI酶切位点以及Linker下半段，下游：5’-GCGCTCGAGTCAGAGTTTGAGTAAGCCAAAGGA-3’，引入了XhoI酶切位点。

真核表达载体的构建和软件分析模拟

真核表达载体的构建：PCR扩增