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微生物实验室无菌操作技术规范

第一篇：微生物实验室无菌操作技术规范

1.目的

规范无菌操作流程，减少及避免发生染菌现象出现。

2.使用范围

无菌室及洁净区的操作。

3.无菌操作技术原则

3.1环境要清洁，在每次无菌操作结束后都需要对环境进行清理、

清洗；且避免操作前进行清扫。

3.2做好个人卫生，进入无菌室前需修剪指甲、洗手，穿好无菌服，

帽子需遮住所有头发，口罩遮住口鼻。

3.3在无菌操作时，不可讲话，打喷嚏，对怀疑染菌的无菌物品，

不可使用。

4.内容

4.1.1准备：工作人员着装整洁，洗手、戴口罩、修剪指甲；备齐

用物（如：接种针、接种环、酒精灯、斜面、平皿、摇瓶、75%酒精

棉、无菌水等）；核对无菌用品，接种菌种的种类、型号。

4.1.2所有实验使用的物品都需要进行消毒、灭杀；进入洁净区前

需要经传递窗进行紫外表面消毒30min以上；

4.1.3开始实验前需要打开超净台的紫外灯，消毒半个小时以上；

超净台避免放入过多的物品（一般只放入当次的实验所有的物品），

所使用的试剂和耗材都需事先进行灭菌（灭菌日期超过4天的需重新

消毒）。

4.1.4进入洁净区前关闭紫外灯，并打开风机，等待半个小时以上，

使臭氧尽量排放干净。4.1.5除去手腕等部位的饰品，穿好无菌服，戴

好头套、口罩，做到“三不漏”：不暴漏头发，不暴漏口鼻，不暴漏

躯干皮肤和衣物。4.1.6双手要进行清洗、消毒。

4.1.7要经风淋室风淋30秒后再进入洁净室。4.1.8在局部百级区

域操作要戴一次性无菌手套。4.1.9实验操作过程中应尽量减少进入洁

净区的人员（不超过4人/间）并尽量减少人员走动。4.1.10所有要放

入超净工作台的物品都需进过消毒液喷洒擦拭消毒。

4.1.11无菌物品若取离超净台则视为已污染，不得放回再用；无

菌液体在取离超净台前必须密封其开口；密封的无菌液体容器在放入

超净台后，对其开口前须对开口在酒精灯火焰上烧烤。

4.1.12在拆开任何一次性无菌使用耗材的包装时都要在超净台内

完成，并须同时保证与细菌直接接触的使用端/面不得与超净台内的任

何物品发生触碰。4.1.13工作台面上的用品要放置有序、布局合理，

一般说酒精灯（当工作不需要时也可不用）在中间，右手使用的物品

在右侧，左手使用的物品在左侧。工作时忌忙乱而要有序。4.1.14开

始操作前先用医用酒精对双手进行消毒。4.1.15点燃洁净工作台内的

酒精灯，在打开/关闭试剂瓶口、试管口时应将瓶口或者试管口过火；

接种针、接种环在使用前或在与台面发生碰触后应经过火焰的灼烧；

接种针/接种环过火操作方法为：使其头部到身部反正面在火焰上各烤

燎通红；烧过的器械要冷却后才能使用，以免对细菌造成损伤。

4.1.16操作前试管（或摇瓶）口需要在火焰上方反转镣铐两周。

4.1.17操作时左手拿试管（或摇瓶），右手拇指、食指、中指操作接

种针（接种环），右手小指和无名指夹住瓶塞，取下瓶塞，瓶塞再反

转镣铐两周后开始操作。4.1.18在超净台内，尽量避免瓶口长时间敞

开直立。

4.1.19盖封瓶口时，应将瓶口和瓶盖内面各自在火焰上燎烤两周

再盖上瓶盖。

4.1.20实验用胶塞、橡皮乳头等橡胶和塑料用品在过火焰时也不

能时间过长，以免烧焦产生有毒气体，危害培养的细胞。4.2无菌液体

标准转移程序：

4.2.1无菌液体的转移须在超净台进行，转移过程要尽量保持密闭，

必须用移液管或移液器来完成操作；

4.2.2移液管上方口应塞入棉絮（脱脂棉），用牛皮纸包好进行消

毒灭杀；

4.2.3无菌液体瓶再封口时，须将瓶口和瓶盖分别燎烤2周后再封

盖；封盖后须贴上相应的标签；

4.2.4在使用移液管转移液体时，应保证移液管尖端距移液器边缘

1cm以上；在使用移液管时，每次液体吸入量不应超过移液管的警示

标记，更不能触及移液管上方的防尘棉絮；在使用移液管移出废液时，

移液管尖端应距废液缸5cm以上；在将细胞悬液转移至培养瓶中时，

移液管尖端应距培养瓶0.5cm以上；

4.2.5放置吸管时管口应向下倾斜，以防液体倒流入橡皮乳头内而

引起污染或者损坏电动移液枪；

4.2.6向离心管、细胞冻存管、培养瓶、培养