食品病原微生物检验.ppt

3.1.1前增菌－目的：在营养丰富的培养基中进行前增菌一段时间，可使受伤菌修复损伤，从而提高卫生指示菌的检出。受热、冷藏、冻结、干燥、射线处理过的食品和其他高渗压或水活性低的食品，以及经过消毒过的设备，其表面均可能含有因细胞遭受外界环境抑制而在生理状态上有缺陷的细菌，即受伤细菌。在适当的条件下，它们能修复自己或能从抑制状态中恢复，并具有危害公共卫生的潜在危险。现代研究表明，无论细菌遭受损伤是什么类型，在适当培养基和适宜的温度下，都能很快修复；修复过程先于菌体细胞的繁殖；完全修复的细菌对用于检出该菌而加到培养基中的选择剂反应正常。前增菌时间多为4h左右，在这样的条件下，受伤的细菌能完全修复，其他菌又不致于大量繁殖。3.1.2选择性增菌目的：最大可能的检出目的菌一种是抑制除目的菌以外其它杂菌的生长，一种是在不影响其他杂菌生长的情况下促进目的菌的生长。选择性培养基直接进行增菌注意以下问题：一是考虑到受伤细菌可能在选择性培养基中不能生长；二是可能选择剂对受伤菌有毒性作用因此，恢复培养时，尽量选用非选择性培养基！致病菌前增菌选择性增菌沙门氏菌缓冲蛋白胨水/APWSC亚硒酸盐胱氨酸增菌液/TTB四硫酸钠煌绿增菌液金黄色葡萄球菌－7.5%氯化钠肉汤10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤副溶血性弧菌－7.5%氯化钠碱性蛋白胨水小肠结肠耶尔森氏菌－改良磷酸盐缓冲液大肠杆菌O157:H7改良EC肉汤3.1.3生化鉴定细菌生化试验原理：细菌在生长过程中会分泌不同的酶参与新陈代谢，各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养基质的分解能力也不一样，因而代谢产物或多或少地各有区别，以供鉴别细菌之用。通过检测细菌酶系统及代谢产物的生理，用生化试验地方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之细菌地生化反应。生化试验分类：呼吸酶类试验：氧化酶试验和细菌色素氧化酶试验。盐利用试验：枸橼酸盐试验、丙二酸盐试验、硝酸盐还原试验；蛋白质代谢试验：蛋白质水解试验、硫化氢试验、吲哚试验、脱羧酶试验、脱氨试验、尿素酶试验；糖代谢试验：糖（醇）类发酵试验、VP和甲基红试验、氧化发酵试验O-F；(1)糖发酵试验在肠道细菌的鉴定上尤为重要细菌可发酵的基质糖（葡萄糖、蔗糖、乳糖）醇（甘露醇）糖苷（甘油）发酵后产生的有机酸乳酸、醋酸、丙酸等发酵后产生的气体甲烷、氢、二氧化碳等指示剂：溴甲酚紫（pH5.2黄-6.8紫）安装倒立的杜氏小管（内充满液体）(2)IMV试验用来快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌，及肠杆菌科细菌的鉴定。I指吲哚试验，它是用来检测吲哚的产生。有些细菌能产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚和丙酮酸。吲哚与对二甲基氨基苯甲醛结合，形成红色的玫瑰吲哚。细菌在糖代谢过程中，分解葡萄糖，所产生的丙酮酸，可被进一步代谢。细菌体内丙酮酸代谢途径的不同，可通过VP和MR实验进行鉴别。甲基红试验（MR）是用来检测由葡萄糖产生的有机酸，如甲酸、乙酸、乳酸等。当细菌代谢糖产生酸时，培养基就会变酸，使加入培养基的甲基红指示剂由橘黄色变为红色。若分解H2S则产生黑色FeS沉淀，若分解糖类产气则可见气泡或裂缝只有斜面和底层均产酸，且赖氨酸脱羧酶阴性者才可排除为沙门氏菌的可能性其余情况即可能是也可能不是沙门氏菌属的细菌(3)三糖铁（TSI）反应葡萄糖乳糖蔗糖说明＋＋＋分解糖类产酸→pH↓→指示剂变黄→斜面底层均产酸变黄为A/A模式＋－－斜面因葡萄糖含量少故分解完后利用蛋白胨产碱且大于酸量故由黄变为深红，为K，底层无氧故缓慢分解葡萄糖而产酸变黄为A，K/A模式＋－＋由于乳糖或蔗糖量大，故斜面和底层均产酸变黄，亦为A/A模式＋＋－生化试验霍乱弧菌拟态弧菌麦氏弧菌霍利斯弧菌海鱼弧菌河弧菌弗尼斯弧菌溶藻弧菌副溶血性弧菌创伤弧菌辛辛那提弧菌沙鱼弧菌精氨酸（１％ＮaＣl）00600959310000000赖氨酸（１％ＮaＣl）991003505000991009957100鸟氨酸（１％ＮaＣl）99990000050955500葡萄糖产气000010010000000麦芽糖999910