生物制药 4-6章复习.ppt

第四章复习;抗体分子的结构—CDR区;改造鼠源性单克隆抗体的目的：;改造后的单抗的类型和特性;;;;双功能抗体;;;诊断血清诊断方法;直接凝集反响(directagglutination)

是将细菌或红细胞等颗粒性抗原与其相应抗体结合产生的细菌凝集或红细胞凝集现象。

〔1〕玻片法〔同种红细胞凝集反响〕

如检查血型的血细胞凝集现象

〔2〕试管法

如诊断伤寒病的肥达氏反响〔Widalreaction〕;2、乙型肝炎病毒外表抗原〔HBsAg〕的反向被动血凝诊断试剂;;3、妊娠诊断试剂;间接凝集反响(indirectagglutination)

????是用可溶性抗原包被在一种与免疫无关的，具一定大小的不溶性颗粒〔即载体颗粒，如：乳胶颗粒或红细胞〕的外表，然后与相应抗体作用，在有适宜电解质存在的条件下，结合产生的凝集现象。;间接凝集抑制试验：将可溶性抗原与相应抗体预先混合，充分作用后，再参加相应致敏颗粒，此时因抗体已被可溶性抗原结合，不再能与致敏颗粒外表相应抗原结合，故不能出现致敏颗粒被动凝集的现象。;;4、抗ABO血型系统血清;人血型的常规ABO分型;毒素的来源;这些毒素的特点：在进入胞浆后，能使蛋白质生物合成停止，从而使细胞死亡。

它们都是高效的细胞毒剂，理论上只要1、2个毒蛋白A链分子进入胞浆，即可杀死一个细胞，因此它们是“生物导弹〞相当理想的“弹头〞。;植物毒素A链能催化真核细胞核糖体60S亚基的失活，使核糖体失去与肽链延伸因子2〔EF-2〕结合的能力，从而使蛋白质生物合成停止。

植物毒素B链能与细胞外表多糖的半乳糖残基结合，并插入细胞膜，形成孔道，帮助A链进入胞浆。

毒素A、B链之间由二硫键相连。

当毒素与细胞外表结合后，细胞膜内凹，形成吞噬泡，然后经高尔基体，转到溶酶体中。在这过程中，一部份毒素A链可能在B链帮助下，穿过膜进入胞浆，使蛋白质合成停止，其他毒素分子可能为溶酶体内的水解酶降解。;第五章复习;动物细胞的形态;动物细胞大规模培养的方法;动物细胞培养的操作方式;1、分批式操作;3连续式操作;4、灌流式操作;动物细胞生物反响器的类型及其根本结构;ATryn〔α-antithrombin〕-首个转基因动物生产的药物获准上市;第六章复习;;(3)大环内酯类抗生素如红霉素、麦迪加霉素。

(4)四环类抗生素如四环素、土霉素等。

(5)多肽类抗生素如多粘菌素、杆菌肽等。它们多由细菌、特别是由产孢子的杆菌产生，;根据抗生素的作用机制分类

(1)抑制细胞壁合成的抗生素如青霉素、头孢菌素。

(2)影响细胞膜功能的抗生素如多烯类抗生素。

(3)抑制病原菌蛋白质合成的抗生素如四环素。

(4)抑制核酸合成的抗生素如丝裂霉素C。

(5)抑制生物能作用的抗生素如抑制电子转移的抗霉素(antimycinl)。;②提取精制：将青霉素发酵液冷却，过滤。

滤液在pH2～2.5的条件下，于萃取机内用醋酸丁酯进行多级逆流萃取，得到丁酯萃取液，转入pH7.0～7.2的缓冲液中，然后再转入丁酯中，

将此丁酯萃取液经活性炭脱色，参加成盐剂，经共沸蒸馏即可得青霉素G钾盐。

青霉素G钠盐是将青霉素G钾盐通过离子交换树脂〔钠型〕而制得。;6.4青霉素生产工艺简述;苯氧甲基青霉素;采用植物油消沫仍旧是个好方法，一方面作为消沫剂，另一方面还可以起到碳源作用，但现在已普遍采用合成消沫剂〔如聚酯、聚醇类消沫剂〕代替豆油。;;;前体用量大于0.1%时，青霉素的生物合成均下降。所以一般发酵液中前体浓度以始终维持在0.1%为宜。

年幼的菌丝不氧化前体，而仅利用它来构成青霉素分子。随着菌龄的增大，氧化能力逐渐增加。

;3、温度控制：青霉菌生长的适宜温度为30℃，而分泌青霉素的适宜温度是20℃左右，因此生产上采用变温控制的方法，使之适合不同阶段的需要。;;提纯工艺;加黄血盐及硫酸锌，那么前者有利于去除铁离子，后者有利于凝固蛋白质。此外，两者还有协同作用。他们所产生的复盐对蛋白质有吸附作用。

为了有效的去除发酵液中的蛋白质，需参加絮凝剂。絮凝剂是一种能溶于水的高分子化合物。;提取;青霉素的提取采用溶媒萃取法。

青霉素游离酸易溶于有机溶剂，而青霉素盐易溶于水。;6.5半合成青霉素;青霉素的抗菌机理;;;细菌耐药性;③PBPs靶蛋白与抗生素亲和力降低、PBPs增多或产生新的PBPs均可使抗生素失去抗菌作用。

例如MRSA〔methicillinresistantStaphylococcusaureus〕具有多重耐药性，其产生机制是PBPs改变的结果，高度耐药性系由于原有的PBP2与PBP3之间产生一种新的PBP2〔即PBP2a〕，低、中度耐药系由于PBPs的产量增多或与甲氧西林等的