第14章-液相色谱法.ppt

第十四章农药残留

测定方法-HPLC法二、流动相的基本要求保持色谱柱的稳定性，因而与固定相不互溶（延长柱寿命）不发生不可逆吸附有合适的pH值化学惰性—不与样品及固定相发生反应。UV：在紫外线区“透明”示差：折射率与溶剂有较大差异电化学检测器：电惰性。对样品有很强的溶解力。清洗与更换方便低价、毒性小、纯度高。2.流动相的选择有合适的理化性质（沸点、粘度等，尽可能小一些）合适的强度（分配系数要合适，简单样品可大，复杂样品要小）混合溶剂（有等度和梯度之分）极性合适（需根据溶剂的性质而定）3、流动相的物理参数溶解度参数（溶剂极性的量度）：与样品分配比有关，要适中。沸点：要低些，便于回收分离样品。粘度：柱效与粘度成反比，要求早在0.4～0.5cP。混合溶剂一般能降低粘度。4、混合溶剂可靠改变溶剂组成来调节溶剂的强度等，以适合不容的样品。等度淋洗：淋洗过程中溶剂组成不变，强度恒定，k值在10以内可得较好的分离。梯度淋洗：淋洗过程中溶剂组成随时间而变，一般使强度按程序增加，使组分在最合适的k值处洗出。5、梯度淋洗使用于极性范围宽的混合物的分离。优点：提供限单位时间内的最大分离度。提高出峰的对称性减小峰宽降低检测5、梯度淋洗问题：要用高纯试剂（贵）。可能在固定相上产生杂质富集，需再生处理（尤其是极性柱），可用10～30倍柱体积的溶剂淋洗。（一）、防止堵塞（一）、防止堵塞（一）、防止堵塞5．要防止反冲（流动相逆向流动），否则使固定相层位移，柱效下降。6．柱子两端用金属螺帽封闭，保存在纯净的有机溶剂中。应该将柱子保存在以下pH范围内的水溶液流动相中：2pH8.5。为了长期保存，最好用纯有机溶剂（如甲醇）清洗柱子。7．一定要防止柱子干涸，特别是硬胶柱。二、液相色谱柱的保养8．使用卫柱(GuardColumn,亦称预柱)。连续注射含有强滞留(不被洗脱)组分的样品，将使柱效下降，保留值改变，选择性变坏，柱寿命缩短。为了延长柱寿命，在进样阀和分析柱之间加上卫柱。二、液相色谱柱的保养卫柱较短(5~10cm)，固定相与分析柱类似。其作用是吸着强滞留的组分，防止对分析柱的污染，保持分析柱性能稳定。实验表明，只要卫柱与高效、小粒度分析柱联用，除了使k’为零的组分的塔板数大大减少外，对k’值较大的组分，其柱效下降很少。本节首页退出本章使用保护柱带整体过滤片的保护柱本节首页退出本章步骤1：使用含盐缓冲液后（如离子对试剂）应用溶解性强的溶剂（如水）进行冲洗步骤2：先断开检测器，然后用对来自样品中的物质有强溶解性的溶剂进行冲洗。对于反相色谱柱，可使用甲醇，乙睛四氢呋喃，氯仿，庚烷等，在此条件下，应避免溶剂的pH低于2或高于8若经过步骤1和步骤2后，压力仍没下降至步骤36、柱堵塞的修复**淋洗液色谱柱检测器数据处理液相色谱仪本节首页退出本章一、GC与HPLC的比较本节首页退出本章本节首页退出本章1、适用于所选的检测器本节首页退出本章本节首页退出本章本节首页退出本章本节首页退出本章本节首页退出本章本节首页退出本章三、液相色谱柱的保养柱的稳定性与固定相类型及使用情况有关。为了保持柱效、柱容量及渗透性，必须进行仔细地保养。是否会由于柱外效应，使分析柱的柱效明显下降？本节首页退出本章1、必须将流动相仔细地蒸馏、过滤。在流动相贮槽与柱之间，使用0.5μm孔径的过滤器。水往往是一个重要的污染源。在水溶液流动相（如缓冲液）中，细菌容易生长，可能堵塞筛板。防止细菌生长的办法是加入抑制剂，如0.01%NaNO3。显然，抑制剂不能干扰分离和测定。本节首页退出本章2、在恒定压力下，发现流量减少，柱子可能部分堵塞。堵塞最容易发生在极窄的入口接头处以及入口、出口筛板处。堵塞后需要仔细拆洗，清除堵塞物，但必须防止较强的机械震动，防止用热手接触柱子，以扰动柱内的固定相层，使柱效发生变化。本节首页退出本章本节首页退出本章本节首页退出本章本节首页退出本章三、检测器本节首页退出本章三、检测器紫外检测器UV-DETECTOR（UV）本节首页退出本章二极管阵列检测器DIODEARRAYDETECTOR(DAD)质谱检测器MassSpecrometryUV-VISDADFluRefraElecConducotherMs?检测器使用统计本节首页退出本章四、液相色谱仪的使用1、流动相（2）溶剂要与检测器匹配。对于紫外吸收检测器，应注意选用检测器波