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微生物检验方法验证方案

微生物限度检查方法（平皿法）

验证方案

目录

一、验证方案的制定

二、验证方案的起草与审批

三、微生物限度检查方法（平皿法）验证方案

1．验证目的和原理

2．验证方法步骤

3．试验实施

3.1试验前的准备

3.2验证试验操作

3.3试验结果

4．验证结果评价分析

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5．附件

微生物限度检查方法（平皿法）验证文件

一、验证方案的制定验证项目名称编号验证小组组员成员职务组长副组长组员姓名步骤验证方案组织实施进度二、验证方案的起草与审批1验证方案的起草验证项目名称编号微生物限度检查方法（平皿法）验证VF-PR-17-A第2页共14页主要工作职责方案设计责任人方案实施负责人操作人操作人操作人操作人实施日期微生物限度检查方法（平皿法）验证VF-PR-17-A

起草部门生产部质控部

2．验证方案的审核与批准

起草人签名日期年月日年月日验证方案审核人：审核日期：年月日验证方案批准人：批准日期：年月日三、微生物限度检查方法（平皿法）验证方案1．验证目的和原理1.1验证目的

为确认所采用的方法适合于该药品的细菌、霉菌、酵母菌数的测定，特制定本方案。验证过程应严格按照本方案规定的内容进行，若因特殊原因确需要变更时，应报验证委员会批准。1.2原理

通过比较试验4组中试验菌的恢复生长结果来评价整个检验方法的准确性、有效性和重现性。2．验证方法步骤

2.1验证前的准备进行微生物限度检查方法（平皿法）验证前，所有的平皿和稀释剂都应该严格按照相关的灭菌程序消毒，以确保其对试验的结果没有影响。试验菌应包括G-、G+、酵母菌和霉菌类微生物以基本覆盖样品中可能存在的微生物。

2.2验证试验的操作计划用3个不同批号产品按照微生物限度检测方法进行平行试验，通过计算回收率来判断微生物限度检查方法是否对产品有影响。2.3试验结果可接受标准用标准菌株评价方法“尿素维生素E乳膏的微生物限度检查”对检品中微生物的抑制性，试验结果应显示3次独立的平行试验中，稀释剂对照组的菌回收率应不小于70%，试验组的回收率也不低于70%。3．试验实施3.1试验前的准备

3.1.1主要仪器设备：高压蒸汽灭菌器、恒温烘干箱、净化工作台、生物安全柜、

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恒温培养箱、霉菌培养箱。

3.1.2操作环境：操作间应该安装空气除菌过滤层流装置。环境洁净度不应低于10000级，局部洁净度为100级（或防置同等级净化工作台）。操作间或净化工作台的洁净空气应该保持对环境形成正压，不低于4.9pa。

3.1.3试验样品：尿素维生素E乳膏：

批号批号批号

3.1.4稀释液和试剂：PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液无菌十四烷酸异丙酯3.1.5器具无菌培养皿：（直径90mm）无菌移液管（5ml）3.1.6验证用微生物名称及其编号

实验菌株的来源：菌株名称大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌白色念珠菌黑曲霉编号由菌名首字母—传代代数—制备日期组成3.1.7培养基

名称营养琼脂培养基改良马丁琼脂培养基3.2验证试验操作3.2.1试验菌的制备和稀释

将大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌接种至10ml的无菌营养肉汤中在30～35℃下培养18～24小时，将白色念珠菌接种至良马丁流体培养基中，23～28℃下培养24～48小时。将黑曲霉接种至改良马丁琼脂培养基中，在23～28℃下培养5～7天小时。将上述培养物用0.9%的无菌氯化钠溶液制成每1ml含

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生产商培养基批号配制日期有效期内控编号

菌落数为50～100cfu的菌悬液。

3.2.2用不同类别的微生物考察供试液及检验程序的抑菌性，将试验分为4组

A样品试验组准确取供试品10g，加至含20ml无菌十四烷酸异丙酯和无菌玻璃珠的适宜容器中，必要时可增加十四烷酸异丙酯的用量，充分振摇，使供试品溶解。然后加入45℃的PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml，振摇5～10分钟，萃取，静置使油水明显分层，取其水层作为1：10的供试液。用移液管准确吸取1.0ml供试液至平皿中；并在每个平皿中接种50～100cfu试验菌，立即倾注营养琼脂培养基，每个试验菌平行接种