DB15T+3689-2024荒漠肉苁蓉愈伤组织生产技术规程.docx

ICS65.020.01CCS

ICS

65.020.01

CCS

B38

内蒙古自治区地方标准

DB15/T3689—2024

荒漠肉苁蓉愈伤组织生产技术规程

CodeofpeacticeofcallusproductionforCistanchedeserticolaMa

2024-10-25

2024-10-25发布

2024-11-25实施

内蒙古自治区市场监督管理局

发布

前 言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

本文件由内蒙古自治区卫生健康委员会提出。

本文件由内蒙古自治区中药材（蒙药材）种植标准化技术委员会（SAM/TC54）归口。本文件起草单位：内蒙古自治区农牧业科学院、内蒙古医科大学附属医院。

本文件主要起草人：何江峰、王力伟、赵杰、安江红、房永雨、赵小庆、孙华、赵梦然、刘红葵。

荒漠肉苁蓉愈伤组织生产技术规程

范围

本文件规定了荒漠肉苁蓉的外植体采集、预处理、培养基配制、愈伤组织诱导及继代培养的方法。本文件适用于荒漠肉苁蓉愈伤组织的生产。

规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T603化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

DB15/T1940西部沙樱组织培养技术规程

术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

荒漠肉苁蓉CistanchedeserticolaY.C.Ma

列当科肉苁蓉属多年生的根寄生草本。

4材料准备

材料选择

材料为寄生于梭梭（Haloxylonammodendron（C.A.Mey.）Bunge）根部的无病害、健壮的荒漠肉苁蓉带鳞叶的肉质茎。

材料采集

采集时间

春季苗刚出土时或冬季冻土之前采挖。

采集地点

内蒙古阿拉善盟的梭梭林。

采集部位

采集地下部分，外观要求表皮及鳞片状叶呈乳白色。

保藏方法

将采集部位埋进沙土中或放入保鲜袋，在4℃条件下保存，保持表面干燥，1个月内处理。

试剂配制

器皿灭菌

按照DB15/T1940执行。

培养基配方

MurashigeandSkoog（MS）培养基为基础培养基，添加2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D）2.0mg/L，赤霉素（GA3）1.0mg/L，聚乙烯吡咯烷酮（PVP）2.0g/L，6-糠氨基嘌呤（KT）0.5mg/L，蔗糖30.0g/L，琼脂7.0g/L。

培养基配制

试剂配制要求

试剂配制按照GB/T603规定方法配制，所用水执行GB/T6682的规定。

1MKOH溶液的配制

精确称取28.0gKOH粉末，用蒸馏水溶解，冷却至室温后，定容至500mL，现用现配。

1MHCl溶液的配制

精确量取43.86mL的市售38%盐酸，加蒸馏水，定容至500mL，现用现配。

2,4-D母液（2.0mg/mL）的配制

精确称取2,4-D粉末0.2g，加1.0mL1MKOH溶液，于90℃水浴加热助溶，冷却至室温后，用蒸馏水定容至100mL。将配制好的母液经0.22μm过滤灭菌器灭菌至100mL无菌试剂瓶中，放4℃冰箱，现用现配。

GA3母液（1.0mg/mL）的配制

精确称取0.1gGA3粉末，加300μL无水乙醇助溶，用蒸馏水定容至100mL。将配制好的母液经0.22μm过滤灭菌器灭菌至100mL无菌试剂瓶中，放4℃冰箱，现用现配。

KT母液（1.0mg/mL）的配制

精确称取KT粉末0.1g，加1.0mL1MKOH溶液助溶，用蒸馏水定容至100mL。将配制好的母液经0.22μm过滤灭菌器灭菌至100mL无菌试剂瓶中，放4℃冰箱，现用现配。

1%次氯酸钠溶液的配制

精确量取100mL次氯酸钠溶液（分析纯，有效氯10%），用蒸馏水定容至1L，现用现配。

培养基配制

精确称取4.74gMS培养基粉末，30g蔗糖，7.0g琼脂粉，2.0gPVP粉末，于800mL蒸馏水中进行溶解，用1M的KOH或HCl将pH值调至5.8，定容至1L。在压力1.1kg/cm2，温度121℃条件下，灭菌30min。待温度降至50℃左右，添加2mL2,4-D溶液，1mLGA3溶液和500μL的KT溶液。

培养基分装

在超净工作台里将配制好的培养基分装在150mL的无菌三角瓶中，分装量是三角瓶容量的1/5～