第二章 微生物的纯培养和显微技术课件.ppt

第二章微生物的纯培养和显微技术分辨率肉眼分辨率一般只有0.25mm光学显微镜分辨率0.18μm电子显微镜可达0.2nmd=0.5λ/ｎsinαＲ?（１／ｄ）式中：n=介质折射率；α=镜口角（标本对物镜镜口的张角），ｎsinα=镜口率介质空气水香柏油α溴萘折射率11.331.5151.66第二章微生物的纯培养和显微技术普通生物显微镜由三部分构成：机械装置：保证光学系统的准确配制，用于固定材料和观察方便。照明系统：包括光源和聚光器。光学放大系统：由物镜和目镜组成，是显微镜的主体，为了消除球差和色差，目镜和物镜都由复杂的透镜组构成。第二章微生物的纯培养和显微技术第二章微生物的纯培养和显微技术二、实验原理机械装置光学装置聚光器聚光器透镜虹彩光圈升降螺旋显微镜的放大倍数：物镜放大倍数×目镜放大倍数第二章微生物的纯培养和显微技术显微镜使用的方法原因分析现象可能原因解决办法视野内没有物像要观察的标本不在视野内调整玻片位置物镜头与玻片标本间的距离大于或小于低（高）倍镜的工作距离重新调节焦距标本太小需用推进器反复找或更换标本标本的颜色浅或透明调节聚光镜或光圈，使视野变暗第二章微生物的纯培养和显微技术明视野显微镜明视野显微镜即常用的普通光学显微镜，生活的细菌在明视野显微镜下观察是透明的，不易看清。解决的措施，一方面是对观察的样品进行改造，发展出各种染色技术，通过特殊的染色方法使细胞着色，增加与背景的反差，便于观察；另一方面进行显微镜的改造，由此发展出不同种类的显微镜，适用于不同的观察目的。第二章微生物的纯培养和显微技术2、暗视野显微镜暗视野显微镜是应用了特殊聚光器，只允许被标本反射和衍射的光线进入物镜，因而视野的背景是黑的，物体的边缘是亮的。应用：生活细菌运动性观察。特点:只能看到物体的存在与运动，不能辨清其微细结构。第二章微生物的纯培养和显微技术3、相差显微镜光波的长短表现为颜色差别，光的振幅高低表现为明亮程度的不同。观察样品各部分厚薄、密度不同，光线通过时直射光和衍射光的光程产生差别，导致出现相位差。相差显微镜配备了特殊的光学装置，利用光的干涉现象，将光的相位差转变成人眼可辨的振幅差（明暗差），形成反差，从而提高了各种结构间的对比度，使各种结构变得清晰可见。应用：观察活的细胞以及细胞内的一些细微结构第二章微生物的纯培养和显微技术4、荧光显微镜紫外线光源照射在具有荧光素的样本上，激发出荧光，使标本在暗的视野中显现出光亮的物体，不同的荧光素还表现为不同的颜色，由此可以进行定性和定量的研究。应用：生物组织、生理、病理、微生物、医药、食品、化学等诸方面的鉴定等第二章微生物的纯培养和显微技术电子显微镜与光学显微镜的差异：1）以电子波(波长最短可达到0.005nm)代替光源，电镜实际的分辨率比光镜提高约1000倍。2）电镜镜筒中要求高真空。所以很难观察活的生物。3）以电子透镜（电磁圈）代替光学透镜，4）电子像人肉眼看不到，需用荧光屏来显示或感光胶片作记录。第二章微生物的纯培养和显微技术电子显微镜按结构和用途可分为：透射电子显微镜(transmissionelectronmicroscope):电子束穿过薄切片扫描电子显微镜(scanningelectronmicroscope):观察样品的表面结构第二章微生物的纯培养和显微技术二、显微观察样品的制备要根据显微镜和样品的特点来制备主要讲述光学显微镜的制样。第二章微生物的纯培养和显微技术1、活体观察压滴法：将菌悬液滴于载玻片上，加盖盖玻片后立即进行显微镜观察。悬滴法：在盖玻片中央加一小滴菌悬液后反转置于特制的凹载玻片上后进行显微镜观察，为防止液滴蒸发变干，一般还应在盖玻片四周加封凡士林。菌丝埋片法：将无菌小块玻璃纸铺于平板表面，涂布放线菌或霉菌孢子悬液，经培养，取下玻璃纸置于载玻片上，用显微镜对菌丝的形态进行观察。插片法：第二章微生物的纯培养和显微技术2、染色观察固定的目的：杀死细菌并使菌体粘附于玻片上。增加细菌对染料的亲和力。常用的方法有酒精灯火焰加热和化学固定二种第二章微生物的纯培养和显微技术细菌染色法死菌正染色负染色：荚膜染色法等简单染色法鉴别染色法革兰氏染色法抗酸性染色法芽孢染色法姬姆萨染色法活菌:用美蓝或TTC（氯化三苯基四氮唑）等作活菌染色染色观察第二章微生物的纯培养和显微技术滴加少量水挑取菌体涂片干燥固定染色水洗干燥第二章微生物的纯培养和显微技术第二