芒果细菌性黑斑病原菌分子检测技术规范.pdfVIP

NY/T2257-2012

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目。一

E司

一

卒标准按照GBTJ.l给出的规则起草。

本标准由农业部农垦局提山。

本标准由农业部热带作物及制品标准化委员会归口。

本标准起草单位：巾罔热带农业科学院环境与植物保护研究所。

本标准主要起草人：部金基、漆艳香、耐Z；贤、张欣、张贺、陆英、张辉强。

Y/f2257-2012

芒果细菌性黑斑病原菌分子检测技术规范

1范围

本标准规定了芒果细菌性黑斑病原菌［Xanthon-1onascan1卢estrispv.mangiferaeindicαe(Patel.

Moniz.Kulkarni)Robbs.RibeiroKimura］分子检测方法。

本标准适用于叫叶片、枝条：主翩翩翩翩挺、菌的定性检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文也

件。凡是不注日期的寻

NIT1193

3术语和定义

下列术语

3.1

芒果细

scαn1pestris

又称芒

pv.1na吨ife害芒果的检

A.6、A.7和

疫性细菌病

A.8

3.2

致病性

HrpB诱导非寄主

及抗病植物产

3.3

聚合酶链式

．根据模板序列设

模板基因序要l

口·接着在DNA聚合

计的两条引物分别一

复变性、退火和延伸这

酶的作用下以四种脱

一循环‘使欲扩增的基因

4原理

『啕,,

根据芒果细菌性黑斑病原菌过敏位民应和以州l.L岳凶Hr户H序列特有碱基信息设计特异性引物．

对待检样品进行PCR扩增回依据是杏扩增获得预期321bp的DNA片段，判断样品中是杏携带芒果细

菌性黑斑病原菌．

5仪器设备及试剂

见B.1、B.2。

6取样

按附录A捕述的症状仔细检查芒果树叶片、技条、果柄和果实‘发现芒果细菌性黑斑病疑似症状．

/T2257-2012

即取叶片、枝条、果柄或果实200g以上．装人牛皮纸袋巾．送实验室检测。

7PCR检测

7.1PCR反应模板制备

JJlB.1.1。

7.2PCR反应

-0:PlRtl~~管中分别加入以下试剂（25,.,.1，体系）后进行PCR反应：1µI，基闲组DJA‘lOXPCR

缓冲液＜MgPlus)2.5µIJ.脱氧核椅核背股（d:--..JTP）混合物2/.LI....特异性引物（见表1）各o.51.tl...Taq