磷酸化蛋白检测课件.ppt

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-高通量,多参数检测磷酸化蛋白;磷酸化蛋白检测与信号转导研究的关系;磷酸化蛋白检测的常用方法;液相蛋白芯片技术-BDCBAFlexset;微球和流式检测平台的强大结合;微球在流式细胞仪上的识别方式;TheBD?CBAFlexSet磷酸化蛋白检测技术;BDCBAandWesternblot检测细胞裂解液中phospho-ERK水平;BDCBAandWesternblot检测细胞裂解液中phospho-P38水平;实验流程;T细胞受体信号转导途径;KineticsofJurkatcellactivationwith

anti-CD3/CD28;Tcellreceptorsignalingresponsestotreatmentwithanti-CD3/CD28antibodies;EffectofPD-98059treatmentonTcellreceptorsignalingresponsetoanti-CD3/CD28;BD?CBAFlexSetphosphoproteinassays;具有历史意义的磷酸化检测技术(phosflow)

-单细胞水平的信号转导研究;单细胞水平的磷酸化蛋白检测的特点;Westernblot和PhosFlow技术的比较;ControlUnstimulated

IL4/IL6Simulated;新鲜的全血与放置24小时的全血中磷酸化信号的比较;Phosflow与经典的WesternBlots的比较;固定

2%多聚甲醛处理10-15min.

破膜

以酒精/去污剂处理为基础

染色

存储于PBS+1%BSA中的直接荧光标记的抗体

检测分析

stainingcontrolsarecrucial.;

IL-4+IL-6刺激全血后检测胞内Stat-3/Stat-6磷酸化水平

;Phosflow的应用及前景;;11ColorFlowCytometryLookingatSignalinginSubpopulationsofCells;ClusteringofBiosignature,ClinicalSignificance;SystemsBiology:SignalingNetworkMapping;谢谢云南省肿瘤医院肿研所

谢谢各位的倾听!

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