一种抗口蹄疫病毒的类病毒粒子VLP疫苗及其制备方法 .pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利说明书

(10)申请公布号CN105056227A

(43)申请公布日2015.11.18

(21)申请号CN201510428078.8

(22)申请日2015.07.21

(71)申请人复旦大学

地址200433上海市杨浦区邯郸路220号

(72)发明人刘明秋苗巍男郑兆鑫

(74)专利代理机构上海正旦专利代理有限公司

代理人王洁平

(51)Int.CI

A61K39/135

C12N15/866

C12N15/62

C12N15/42

C12N15/34

A61P31/14

权利要求说明书说明书幅图

(54)发明名称

一种抗口蹄疫病毒的类病毒粒子

VLP疫苗及其制备方法

(57)摘要

本发明属于遗传工程技术领域，具

体为一种抗口蹄疫病毒的类病毒粒子VLP

疫苗及其制备方法。本发明涉及的类病毒

粒子（VLP）疫苗是由含有口蹄疫病毒的

抗原表位基因和作为载体的猪圆环病毒

（procine？circovirus，PCV）的外壳蛋白

CAP基因的重组杆状病毒连接形成的，其

中口蹄疫病毒的抗原基因可以是任何毒株

的抗原表位基因。该重组杆状病毒转入表

达体系后传代到第三代可以收获重组病毒

粒子，提取出的类病毒粒子便是抗口蹄疫

病毒的VLP疫苗。该疫苗免疫口蹄疫模式

动物豚鼠后，可以使37.5%的豚鼠免受口

蹄疫病毒的感染。

法律状态

法律状态公告日法律状态信息法律状态

权利要求说明书

1.一种抗口蹄疫病毒的类病毒粒子VLP疫苗，其特征在于：以猪圆环病毒PCV的

外壳蛋白CAP基因作为载体，将抗口蹄疫病毒的抗原表位基因插在CAP基因的C

端，二者联合组成抗口蹄疫病毒的类病毒粒子VLP疫苗。

2.根据权利要求1所述的类病毒粒子VLP疫苗，其特征在于，所述类病毒粒子

VLP疫苗是由含有将抗口蹄疫病毒的抗原表位基因和作为载体的猪圆环病毒PCV

的外壳蛋白CAP基因的重组杆状病毒在表达体系中形成的；所述表达体系选自大

肠杆菌，酵母，昆虫细胞，植物或者哺乳动物细胞中任一种。

3.根据权利要求1或2所述的类病毒粒子VLP疫苗，其特征在于：所述抗口蹄疫病

毒的抗原表位基因来自O型、A型或亚洲I型的口蹄疫病毒。

4.根据权利要求1或2所述的类病毒粒子VLP疫苗，其特征在于：所述抗口蹄疫病

毒的抗原表位基因为VP1的141~160aa、21~40aa、200~213aa，VP2的74~88aa，

VP3的26~39aa、VP4的20~35aa或者为上述抗原表位的组合。

5.根据权利要求1或2所述的类病毒粒子VLP疫苗，其特征在于：所述抗原表位选

自O型口蹄疫病毒Mya98毒株的VP1蛋白抗原表位141~160aa，其氨基酸序列为

SEQNo.1，核苷酸序列为如SEQNo.2；或者VP1蛋白抗原表位20~40aa，其氨基酸

序列为SEQNo.3，核苷酸序列为SEQNo.4；或者VP1蛋白抗原表位200~213aa；

或者上述VP1蛋白抗原表位20~40aa和VP1蛋白抗原表位141~160aa的串联组合，

其氨基酸序列为SEQNo.5，核苷酸序列为SEQNo.6。

6.一种如权利要求1所述的抗口蹄疫病毒的类病毒粒子VLP疫苗的制备方法，其

特征在于：其包括：基因制备、重组质粒构建、重组杆状病毒制备、重组蛋白获取

和制苗步骤，具体步骤如下：

(1)分别克隆出CAP、单表位、串联表位基因；

(2)利用重叠PCR获得重组VLP基因；

(3)将上一步的基因克隆入杆状病毒载体获得重组杆状病毒质粒并鉴定；

(4)将上一步质粒转入昆虫细胞内，收