一种测定蛋白质或其水解物中结合态谷氨酰胺含量的方法 .pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利说明书

(10)申请公布号CN103869023A

(43)申请公布日2014.06.18

(21)申请号CN201410131180.7

(22)申请日2014.04.03

(71)申请人郑州新威营养技术有限公司

地址450100河南省郑州市荥阳市建设东路

(72)发明人王章存张子峰张新武王许东

(74)专利代理机构郑州联科专利事务所(普通合伙)

代理人时立新

(51)Int.CI

权利要求说明书说明书幅图

(54)发明名称

一种测定蛋白质或其水解物中结合

态谷氨酰胺含量的方法

(57)摘要

本发明公开了一种测定蛋白质或其

水解物中结合态谷氨酰胺含量的方法，属

于分析技术领域。在常规氨基酸分析中，

蛋白质或肽分子中的谷氨酰胺被盐酸水解

后转化为谷氨酸，分析结果中只能显示谷

氨酸的总量，无法显示蛋白质中谷氨酰胺

的含量。本方法根据蛋白质或肽分子中结

合态谷氨酰胺经特殊试剂双(三氟乙酰氧

基)碘苯（BTI）反应后不被盐酸水解的特

点，借助BTI试剂保护、再经过酸水解后

测定谷氨酸含量，并与未经BTI保护样品

中谷氨酸含量的差异，计算蛋白质或肽分

子中结合态的谷氨酰胺含量。该方法包括

待测样品制备，BTI保护处理、酸解、衍

生、氨基酸色谱柱分离、对照样品制备、

含量测定。此方法简单，快速，灵敏度

高，能及时地指导蛋白质水解工业化生

产。

法律状态

法律状态公告日法律状态信息法律状态

未缴年费专利权终止IPC(主分

类):G01N30/02专利

2022-03-15号:ZL2014101311807申请专利权的终止

日权公告

日

权利要求说明书

1.一种测定蛋白质或其水解物中结合态谷氨酰胺含量的方法，其特征在于：它通过

以下步骤实现：

(1)样品的溶解：取蛋白质或其水解物溶于蒸馏水中，45℃～55℃水浴中搅拌使之

充分溶胀；

(2)样品的BTI保护处理：取步骤（1）样品液，加双(三氟乙酰氧基)碘苯BTI溶液

和吡啶溶液，于50℃～55℃水浴保温，然后，再于60℃～80℃水浴或充氮气蒸干；

(3)对照样品处理：取步骤（1）样品液，加乙腈溶液和吡啶溶液，于50℃～55℃

水浴保温，然后，再于60℃～80℃水浴或充氮气蒸干；

(4)酸水解：在含有（2）、（3）样品的消化管中加入酸，封口后完全水解，再定

容、过滤；

(5)衍生和上柱分析：取步骤（4）水解液，用氨基酸衍生化试剂衍生和上柱；

(6)实验结果的处理：分别以样品质量为基数，通过氨基酸色谱分析并计算，BTI保

护样品和对照样品中的谷氨酸百分含量之差即为结合态谷氨酰胺含量。

2.根据权利要求1所述的蛋白质或其水解物中结合态谷氨酰胺含量的测定方法，其

特征在于：每1.0～3.0mL样品液，加入50μmoL/mL的吡啶溶液0.1～0.5mL，

10mg/mL的BTI溶液1.0～5.0mL，1.0～5.0mL乙腈溶液。

3.根据权利要求1所述的蛋白质或其水解物中结合态谷氨酰胺含量的测定方法，其

特征在于：酸水解所用的酸优选盐酸或醋酸，其浓度4～8moL/L，每1.0～3.0mL

样品液，加入1.0～5.0mL。

4.根据权利要求1,2,3其中之一所述的蛋白质或其水解物结合态谷氨酰胺含量的测

定方法，其特征在于：衍生和上柱分析使用的氨基酸衍生化试剂优选2.4-二硝基氟

苯（DNFB）、苯异硫氰酸酯（PITC）、邻苯二甲醛（OPA）、6-氨基喹啉