免疫学技术—放射免疫技术(临床免疫检验课件).pptx

放射免疫分析

1959年，Yalow和Berson在研究胰岛素和胰岛素抗体的免疫反应时，以放射性碘标记胰岛素来测定糖尿病患者血浆胰岛素的含量，由此

创立了放射免疫分析，并于1977年获得诺贝尔奖

前言

放射免疫技术

放射免疫技术是将放射性核素高敏感的示踪特点和抗原抗体反应的高特异性特点相结合的一种体外测定超微量物质的技术。根据检测原理不同分为放射免疫分析（RIA）和免疫放射分析（IRMA）

放射免疫技术

放射性核素

γ放射性核素（目前常用）

如125I、131I等，以125I最常用，用γ计数器测定

β放射性核素有3H、14C等

以3H最常用，用液体闪烁计数仪测定

放射性核素在发生衰变过程中会释放出射线，衰变方式有α、β、γ三类

用于放射性标记的有β和γ两类

放射性核素

放射免疫分析

放射免疫分析（RIA）是以放射性核素标记的抗原（Ag*）与未标记抗原（Ag）竞争结合特异抗体（Ab）来对待检样品中的抗原进行定量测定的一种技术

放射免疫分析

检测原理

其基本原理是利用标记的抗原（Ag*）和待测抗原（Ag）对限量特异性抗体（Ab）的竞争结合抑制作用

RIA属于竞争性分析

方法类型

标记抗原、标准品抗原（或待检样本）

特异性抗体同时加入反应体系中

平衡法

标准品抗原（或待检样本）和特异性抗体

优先使非标记抗原与特异性抗体达到平衡然后再加入标记抗原竞争与抗体结合

非平衡法

关键技术——抗原抗体反应

Ag*

Ag

反应条件

体积

温度

时间

pH

Ab

(标准Ag/样品Ag)

牢固的抗原抗体复合物

关键技术——分离结合标记物

活性炭吸附法

PEG沉淀法

PR试剂法

双抗体沉淀法

分离彻底、迅速

分离试剂和过程不影响反应平衡

分离效果不受反应介质的干扰

操作简便、重复性好

经济

关键技术——数据处理

参数

cpm

B/T(%)

F/T(%)

B/F(%)

B/B0(%)

注：T即是B与F的总和

标准曲线

晶体闪烁计数器包括了NaI闪烁晶体、光电倍增管以及计数器

测量的放射性信号是仪器输出的电脉冲数：每分钟计数(cpm)

方法评价

RIA敏感度高、特异性强精密度高、重复性好

用血量少、可测定小分子量和大分子量物质等

放射性核素的放射性对人体会产生一定的危害性，且其废物的储存和销毁会对环境造成污染

方法评价

优点

缺点

临床应用

激素

其他

肿瘤标志物

药物浓度检测

癌胚抗原、甲胎蛋白

CA-125、CA-199等

甲状腺激素、促甲状腺激素

胰岛素、C肽等

地高辛、吗啡、苯巴比妥苯妥英钠等

微生物抗原或抗体检测

血液系统疾病检测等

01

02

03

04

小结

思考题

放射免疫分析的原理是什么？

你怎样评价该技术？

免疫放射分析

1968年，Miles和Heles将放射性核素标记抗胰岛素抗体上，并采用固相吸附的方式除去游离标记抗体，进而检测牛血清中胰岛素获得

成功，为区别经典的RIA,将该方法命名为免疫

放射分析或免疫放射度量分析

前言

放射免疫技术

放射免疫技术是将放射性核素高敏感的示踪特点和抗原抗体反应的高特异性特点相结合的一种体外测定超微量物质的技术。根据检测原理不同分为放射免疫分析（RIA）和免疫放射分析（IRMA）

放射免疫技术

免疫放射分析

从放射免疫分析（RIA）的基础上发展起来的核素标记免疫测定，其特点为用核素标记的抗体直接与待检抗原反应，并用固相免疫吸附剂作为B或F的分离手段

免疫放射分析

检测原理

基本检测原理是将放射性核素（125I）标记在抗体上，使用过量的标记抗体（Ab*）与待测抗原（Ag）反应，待测Ag量越多，所结合的Ab*就越多，产生的标记Ag-Ab*也就越多，待测Ag的量与放射性强度成正比

IRMA属于非竞争性免疫结合反应

Ag+Ab*

Ag-Ab*+Ab*

方法类型

直接IRMA

双抗体夹心法IRMA

标记抗抗体法

双标记液相IRMA

关键技术——抗原抗体反应

Ag

Ab

固相抗原抗体复合物

*

牢固的抗原抗体复合物

Ab*

关键技术——分离技术

固相吸附分离技术：一般采用聚苯乙烯管作为反应器和固相吸附材料

固相吸附分离技术

关键技术——数据处理

参数

cpm

B/T(%)

F/T(%)

B/F(%)

B/B0(%)

注：T即是B与F的总和

晶体闪烁计数器包括了NaI闪烁晶体、光电倍增管以及计数器

测量的放射性信号是仪器输出的电脉冲数：每分钟计数(cpm)

方法评价

效率高、操作简便

灵敏度高，特异性强

稳定性好

抗体用量较多

抗体的纯化较难

方法评价

优点

缺点

临床应用

抗体适用于大分子蛋白质和多肽类激素的检测分析，如CA153，人血清催乳素、胃蛋白酶，血清TSH等以及某些难以标记的病毒抗原

IRMA的测定对象主要限于有两个以上抗