新生儿血清学“三项试验（输血检验技术）.pptx

临床输血检验技术

新生儿血清学“三项试验”

1.掌握新生儿血清学“三项试验”试验原理

2.熟悉新生儿溶血“三项试验”操作步骤

3.了解新生儿溶血“三项试验”临床意义

学习要求

直接抗人球蛋白试验

在盐水介质中，不完全抗体可以致敏人红细胞，但不能让红细胞凝集。加入抗人球蛋白试剂后，抗人球蛋白分子Fab段能与包被在红细胞上球蛋白分子的Fc段结合，借助其桥梁作用，从而使已被不完全抗体致敏的红细胞出现凝集，而未被抗体包被的红细胞则不出现凝集。

原理

【直接检测新生儿红细胞上是否被不完全抗体所致敏】

直接抗人球蛋白试验

器材与试剂

【器材】

试管架、试管、记号笔、微量加样器、37℃水浴箱、塑料吸管、离心机、显微镜、玻片、微柱凝胶孵育器、微柱凝胶离心机

【试剂】

多特异抗人球蛋白试剂或抗IgG和抗C3d单价抗球蛋白血清、IgG抗D致敏的2%~5%RhD阳性红细胞悬液、2%~5%正常人红细胞悬液和生理盐水、Coombs微柱凝胶卡等。

直接抗人球蛋白试验

操作

（试管法）

配制5%悬红

标记试管

加样

加抗人球试剂

直接抗人球蛋白试验

操作

（试管法）

结果观察

结果判断

单特异性检测

直接抗人球蛋白试验

操作

（微柱凝胶法）

将受检者红细胞、阳性对照红细胞和正常人RhD阳性对照红细胞配制0.8%红细胞悬液

取出Coombs微柱凝胶卡，标记检测孔、阳性孔和阴性孔

在三孔中分别加入多特异性球蛋白试剂50ul

分别取0.8%待检者红细胞、0.8%阳性对照红细胞、0.8%正常人红细胞悬液各50ul分别加入检测孔、阳性孔和阴性孔。

将加好的凝胶卡置于微柱凝胶孵育器内，37℃孵育15min.

将孵育好的凝胶卡置于微柱凝胶离心机内，1000r/min离心10min

取出微柱凝胶卡观察结果

直接抗人球蛋白试验

操作

（微柱凝胶法）

直接抗人球蛋白试验

质量控制

1.要证实直抗试验阳性不是补体体外致敏结果，用EDTA抗凝标本，抗凝后立即试验，以免放置过久造成假阳性结果。若怀疑冷抗体引起DAT阳性，标本凝固应保持在37℃，直至血清分离出来。

2.每次试验都必须设立阴性和阳性对照。被污染、全凝集或冷凝集均可出现假阳性。

3.标本若为直抗阳性需区别直抗类型，即用单特异性IgG抗体、C3d抗体重复上述操作以鉴别致敏在细胞上免疫分子种类。

4.Rh新生儿溶血病的直抗结果都相对强，一般≧2+。而ABO新生儿溶血病的直抗呈弱阳性甚至阴性。因此新生儿直抗强弱是区别ABO和Rh-HDN的主要标志。

血浆游离抗体试验

原理

用新生儿血清加上A、B型红细胞悬液，做酶法及间接抗人球蛋白试验，并以此试验来验证新生儿血清中是否存在与其红细胞不配合的IgG抗A或抗B，这些来自于母亲的IgG抗体可与新生儿红细胞结合，婴儿可能受害，引起新生儿溶血病。

血浆游离抗体试验

操作

（试管法）

血浆游离抗体试验

操作

（微柱凝胶法）

血浆游离抗体试验

检测意义

指示红细胞

意义

AcBcOc

+--

-+-

++-

+/-+/-+

---

游离的抗-A

游离的抗-B

游离的抗-A、抗-B或者抗-AB

游离的ABO系统以外抗体

无游离抗体

血浆游离抗体试验

质量控制

1.微柱凝胶卡式法检测血清游离抗体时应根据说明书配制红细胞悬液浓度。

2.游离试验阳性常发生在新生儿溶血病早期或病情严重时，应在出生后3-7天内进行检查，避免致敏红细胞被破坏导致假阴性结果。但游离试验阴性并不说明病情较轻，该试验在新生儿溶血病检测中仅起到辅助诊断作用。

3.游离抗体阳性必须是可以检测到能与患儿红细胞起反应的抗体，不依据患儿血型则无法准确判断该实验结果

红细胞抗体放散试验

放散实验红细胞上的抗原与血清中的抗体在适当条件下能发生凝集或致敏，这种反应是可逆的，如果改变某些条件，抗体又可以从结合的细胞上放散下来，再用相应红细胞鉴定放散液内抗体的种类，从而进行新生儿溶血病的诊断。

常用方法

热放散法

冷放散法

乙醚放散法

红细胞抗体放散试验

热放散试验

结合在红细胞上的抗体可以用加热的方式进行分离，然后再进行抗体种类鉴定。用生理盐水洗涤待检红细胞，将离心后形成的压积红细胞放入56℃水浴中振摇一定时间后，再高速离心后取上清液（放散液）与已知红细胞反应看是否凝集来鉴定放散液中抗体种类。

热放散试验

1

将受检者红细胞用生理盐水洗涤3次，以3000r/min离心5min,弃去上清液。在压积红细胞中加入等量生理盐水，混匀。

2

将试管置于56℃水浴振荡箱不断振摇10min，取出试管，立即以