紫外分光光度计检测核酸浓度和纯净度.docx

紫外分光光度计检测核酸浓度和纯净度

A260是核酸最高吸收峰的吸收波长，最佳测量值范围是0.1到1.0，如果不在次范围建议稀释或浓缩样品；样品吸光度小于0.05,检查是否存在操作因素，正常情况下，DNA样品的吸光度一定大于0.1，样品中出现杂质或者不错纯净会使吸光度减小。

A280是蛋白和酚类最高吸收峰的吸收波长。因此A260/A280的比值可以对核酸纯度进行评估，一般情况下，纯净的DNA的A260/A280比值为1.8,纯净的RNA为2.0.如果比值较低，表明样品中存在蛋白或者酚类物质的污染，需要纯化样品，特别说明A260/A280=1.5时，相当于50%蛋白质/DNA溶液。

A230是碳水化合物最高吸收峰的吸收波长，A260/A230比值可以对核酸样品纯度进行评估，纯净的DNA或者RNA的A260/A230比值为2.5。如果比值小于2.0，说明样品存在碳水化合物、盐类、有机物的污染，需要纯化样品。特别说明，A230产生负值主要是由于在很低的DNA浓度

A320/A340检测吸光值用于检测样品溶液的浊度和其他干扰因子。纯净的样品改值为0.00,如果不是，说明溶液中有悬浮物，需要纯化样品。