免疫学技术 免疫原的制备(临床免疫检验).pptx

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免疫原的制备

抗原和抗体是免疫学检测中的两大基本因素,抗原的纯化是制备特异性抗体的先决条件制得的抗体又可用于抗原的纯化和检测前言

免疫原免疫原就是抗原是指能够刺激机体产生抗体并能与之发生特异性反应的物质免疫原颗粒性抗原制备如绵羊红细胞抗原细菌抗原的制备可溶性抗原制备如蛋白质、多糖核酸等人工抗原制备包括人工结合抗原人工合成抗原、基因重组抗原

颗粒性抗原制备最后配成1×106/ml浓度的细胞悬液,即可应用绵羊红细胞抗原制备采集新鲜绵羊红细胞注入无菌并带有玻璃珠的三角烧瓶内充分摇动15分钟后除去纤维蛋白再以无菌生理盐水洗涤3次

颗粒性抗原制备鞭毛抗原需用有动力的菌株,菌液用0.3%~0.5%甲醛处理菌体抗原则需要在100℃加温2~2.5小时后应用细菌抗原的制备

可溶性抗原制备蛋白质、酶、核酸、细菌毒素等皆为可溶性抗原制备组织匀浆粉碎细胞蛋白质脂多糖核酸提取

可溶性抗原制备组织匀浆的制备细胞破碎的方法反复冻融法超声破碎法溶菌酶处理法表面活性剂处理法高速捣碎法研磨法

蛋白质抗原提纯方法亲和层析离子交换层析凝胶过滤选择性沉淀法超速离心法电泳010203040506根据蛋白质分子大小不同进行分离根据蛋白质在不同盐浓度中溶解度不同进行的分离根据蛋白质密度的不同进行分离根据蛋白质分子量和电荷量不同进行分离根据生物大分子生物学特异性进行分离,如抗原抗体结合根据电荷不同进行分离

纯化抗原的鉴定含量分子量纯度免疫活性常用的鉴定方法聚丙烯酰胺凝胶电泳法酶联免疫吸附试验免疫电泳法双向琼脂扩散试验等

人工抗原用化学合成法或基因重组法制备的抗原人工抗原人工结合抗原人工合成抗原基因重组抗原

人工结合抗原半抗原和大分子物质结合后即具有免疫原性,这种经过人工修饰的半抗原称之为人工结合抗原,用于偶联半抗原的大分子物质称为载体半抗原载体蛋白质类多肽聚合物大分子聚合物物理法化学法鉴定:吸收光谱分析法和核素标记半抗原渗入法

人工合成抗原可用于研究氨基酸种类、序列或蛋白质抗原性及免疫原性关系等用化学方法将活化氨基酸聚合,使之成为合成多肽,即人工合成抗原

基因工程抗原将编码免疫原性氨基酸序列的基因克隆化并与适当载体DNA分子相结合然后引入受体细胞中使之表达,能获得免疫原性之融合蛋白,经纯化后可作为抗原,即基因工程抗原基因工程抗原

佐剂佐剂是先于抗原或与抗原一起注入机体,可增强机体对该抗原的特异性免疫应答或改变免疫应答类型的物质。免疫佐剂简称佐剂为一类非特异性的免疫增强剂弗氏佐剂和抗原比例为1:1混合方法:研磨法、搅拌注射器混合法弗氏完全佐剂弗氏不完全佐剂溶性免疫原制备人工免疫原制备免疫佐剂小结颗粒性免疫原制备

思考题EED1.免疫原都包括哪些抗原?各种抗原的制备方法有哪些?2.可溶性抗原免疫动物时为什么要用佐剂?

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