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交叉配血试验标准操作规程

一、目的

为规范交叉配血实验的技术操作，保证临床输血安全。

二、适用范围

日常的交叉配血工作。

三、原理

使受血者血清（血浆）和红细胞分别与献血者红细胞和血清（血浆）反应，采用盐水介质法、凝聚胺法，抗球蛋白法检测供、受者之间是否存在相应的红细胞血型抗原-抗体反应，判定受血者与献血者血液之间红细胞血型免疫的相容性。

四、步骤和方法

1、受血者ABO和RhD血型鉴定，执行《血型鉴定操作规程》。

2、根据受血者ABO和RhD血型鉴定结果选择与其ABO和RhD相容血液成分，并复检献血者ABO和RhD血型。

3、分别吸取受血者和献血者30微升压积红细胞到已标示试管内，再分别加入生理盐水1毫升制成3%的红细胞悬液。

4、盐水介质法交叉配血

(1)取试管2支，分别标记为主侧和次侧，主侧加受血者血清（血浆）2滴，献血者3%红细胞悬液1滴，次侧加献血者血清（血浆）2滴，受血者3%红细胞悬液1滴，混匀。

(2)用血型血清学专用离心机以120g离心1min后取出判断结果。

(3)结果判断：先观察有无溶血，再轻轻转动试管观察有无凝集。如无溶血、无凝集，继续进行凝聚胺法交叉配血试验。若盐水介质法试验有凝集或者溶血时，应复检受血者和献血者ABO和RhD血型。

5、凝聚胺法交叉配血

盐水介质法交叉配血试验完成后转做凝聚胺法交叉配血试验

【方法原理】

利用低离子介质（LIM），降低介质的离子强度，减少红细胞周围的阳离子云，以促进红细胞和血清（浆）中的抗体结合。加入凝聚胺可使红细胞产生非特异性的凝聚。最后，加入悬浮液，具有中和凝聚胺的作用，使正常红细胞非特异性凝集散开，试验结果为阴性；但红细胞被相应的抗体致敏，则会被凝聚胺凝结，凝集就不会散开，试验结果为阳性。

【标本采集和处理】

1．标本采集：常规静脉采血于分离胶/促凝剂管（血清）、或静脉采血3ml于EDTA.K2（血浆），一般采用血清进行抗体检查。

2．血清标本的采取时间：要求受检者血样一定要在输血前3天内采集，血样必须是新近的。

【试剂】

1．抗A抗B血型定型试剂。

2．Anti-D(IgM)Biotest。

3．0.9%生理盐水

4．凝聚胺试剂：低离子介质（LIM）、凝聚胺（Polybrene）、悬浮液(Resuspending)。

【操作步骤】

1．从贮血冰箱中取出所需血液，取试管一支，贴上小标签，在血袋配血管中剪下配血管于试管内。

2．取试管二支，标明主次侧，主侧管加受血者血清（浆）2滴，供血者5%红细胞悬液1滴；次侧管加供血者血清（浆）2滴，受血者5%红细胞悬液1滴。

3．各加LIM0.7ml，混匀，再各加Polybrene溶液2滴，并混匀。

4．用离心机1000g离心力（普通离心机以3400rpm），离心10秒，然后把上清液倒掉，轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，无凝集，则必须重做。

5．最后加入Resuspending2滴，轻轻转动试管混合并同时观察结果，如在30秒内凝集散开，代表是由Polybrene引起的非特异性凝集，配血结果相合；如凝集不散开，则为红细胞抗原抗体结合的特异性反应，配血结果不相合。如反应可疑，可进一步倒在玻片上用显微镜观察。

五、质量控制

所有试剂均在有效期内使用，使用前进行质量控制检测

六、注意事项

1、交叉配血的血标本要求来自3天以内且未经稀释，能代表受血者当前的免疫学状态。

2、交叉配血试验出现溶血反应是有重要临床意义的阳性结果，表明交叉配血不合，不可因未观察到凝集而误判为交叉配血相合。

3、由于试剂生产厂家，批号不同等因素，红细胞浓度，吸取样品的量及离心条件等环节要求有所差异，以试剂说明书为准。

4、凝聚胺法交叉配血试验可检出大多数IgG抗体，但对部分IgM抗体的检测不如盐水介质法敏感，故盐水介质法和凝聚胺法交叉配血试验联合应用结果更为可信。