b project传代稳定性产物质量评估内容.pptx

下载文档

0
0
约2.23千字
约 7页
2024-11-17 发布于北京
举报
版权申诉
保障服务

b project传代稳定性产物质量评估内容.pptx

1、本文档共7页，可阅读全部内容。
2、有哪些信誉好的足球投注网站（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。
3、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击这里二次下载。
4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。

BProject传代稳定性产物质量评估

（fed-batch）

检测项目表达序列拷贝数氨基酸序列

细胞株传代稳定性实验代次信息BasicmediumDate2016/2/182016/2/222016/2/262016/2/292016/3/42016/3/72016/3/112016/3/152016/3/182016/3/212016/3/252016/3/282016/4/12016/4/52016/4/82016/4/112016/4/152016/4/192016/4/222016/4/262016/4/2931-2G2-31C4-4P/200MWCB(WMTX)CHOGrowTMCDDF1+6mMGlutamineGenerationn/a1.754.677.1910.6713.1416.2819.8022.1524.7328.1630.9834.6138.5441.4544.3248.1951.8654.9758.2561.2131-2G2-31C4-4P/200MWCB(W/OMTX)Generationn/a1.754.727.3010.7613.2816.6420.1122.7225.2728.8131.7135.3039.4642.3144.9749.0652.7255.9559.5062.3931-2G2-31C4-4P/200MWCB(WMTX)IgG(ng/ml)n/a05400037000650003600037000520003200041000640004700070000820004200042000740006700045000630004100031-2G2-31C4-4P/200MWCB(W/OMTX)IgG(ng/ml)n/a054000380006600037000640004500033000370006000043000630007600033000360007000056000380005200029000备注：Generation0复苏两只WCB(WithMTXandWithoutMTX)

1.复苏细胞至20ml(添加200nMMTX)2.不离心，按照5E5/ml传代至20ml(添加200nMMTX)3.取8ml细胞悬液离心后重悬于20ml新鲜培养基，添加MTX至终浓度为40nMMTX3-4Day1.2E6/ml当细胞密度大于或等于2.0E6/ml5.将培养的29ml细胞悬液加入到51ml的新鲜培养基(不添加MTX)，终体积至80ml6.Fed-batch7.细胞评价DNA序列,拷贝数；

产物质量评价生物活性,SEC,CEX,CZE,CE-SDS,糖型实验设计4当细胞密度大于或等于4.0E6/ml4.取2.9ml细胞悬液，不离心，重悬至终体积29ml新鲜培养基，(其中26.1ml新鲜培养基不添加MTX)当细胞密度〉2.2E6/ml，不超过3.3E6/ml2、3、4步骤剩余细胞送分子组检测，DNA序列和拷贝数

注意事项扩增注意事项：所有步骤中使用的培养基为干粉配制Fed-Batch注意事项：Fed-Batch过程中，每天取样200ul，用Vicell稀释样品后计数Day3,Day7,Day11取样2*0.5ml送IgG培养基配制：CHOGrowTMCDDF1配制__2.5___LCellTurboFeed2补料配制_800_ml葡萄糖溶液(300g/L)配制__100___mlDay11(或最后一天,取样2*0.5ml，IgG/HPLC)

工艺设计工艺条件内容初始培养基CHOGrowTMCDDF1with6mMGlutamine初始培养体积80ml培养时间11天培养温度第0~4天:37°C，第4~11天:35°C接种密度0.8~1.2×106cells/ml补料培养基YPCellTurboFeed2+40mMN-Acytl-D-Glucosamine+30uMMnCl2葡萄糖溶液浓度300g/L补料开始葡萄糖浓度3g/L每天补料量（Vfeed）和补葡萄糖量（VGlc）计算方法Vfeed=Vcurrent*75*(VCD1+VCD2)/2/Glcfeed/1000VGlc=((Glctarget-Glctest)*Vcurrent+(Glctarget-Glcfeed)*Vfeed)/GlcglucoseIfVCD11×107/ml,VCD2=e(0.02*24)*VCD1,orelseVCD2=VCD1IfVCD11.5×10