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生物检材中雷公藤甲素和雷公藤酯甲的液相色谱-串联质谱检验方法

1范围

本技术规范规定了生物检材（血液、尿液和组织）中雷公藤甲素和雷公藤酯甲的液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）检验方法。

本技术规范适用于生物检材中雷公藤甲素和雷公藤酯甲的定性及定量分析，其它非生物检材（可疑植物、食物、呕吐物等）中雷公藤甲素和雷公藤酯甲的定性及定量分析可参照使用。雷公藤甲素和雷公藤酯甲的相关资料参见附录A。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GA/T122毒物分析名词术语

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3术语和定义

GA/T122中界定的术语和定义适用于本技术规范。

4原理

生物检材经液液提取后，用液相色谱-串联质谱法检测。经与平行操作的空白样品和添加样品对照，以保留时间、质谱特征碎片离子峰和离子对相对丰度比进行定性分析；以峰面积为依据，采用外标法或内标法进行定量分析。

5试剂、仪器和材料

5.1试剂

本技术规范试验用水为一级水（见GB/T6682规定），所用试剂：

a)甲醇：HPLC级；

b)乙腈：HPLC级；

c)乙酸铵：HPLC级；

d)乙酸乙酯：分析纯；

e)20mmol/L乙酸铵溶液：称取乙酸铵1.54g置于1000mL容量瓶中，加入适量水溶解并定容至刻度；

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f)内标为纳洛酮或其它合适内标物；

g)标准物质溶液：

1)1.0mg/mL雷公藤甲素和雷公藤酯甲标准储备溶液：分别取雷公藤甲素和雷公藤酯甲标准物质（纯度：＞95%）10mg，精密称定，置10mL容量瓶中，加入适量甲醇溶解并定容至刻度，分别配制成1.0mg/mL雷公藤甲素和雷公藤酯甲标准储备溶液。密封，置于冰箱中冷冻保存，保存时间12个月；

2)雷公藤甲素和雷公藤酯甲标准工作溶液：试验中所用其它浓度的雷公藤甲素和雷公藤酯甲标准工作溶液均由1.0mg/mL雷公藤甲素和雷公藤酯甲标准储备溶液用甲醇稀释得到，置

于冰箱中冷藏保存，保存时间3个月。

h)内标纳洛酮标准物质溶液：

1)1.0mg/mL纳洛酮标准储备溶液：精密称取纳洛酮标准物质10mg置于10mL容量瓶中，加入适量甲醇溶解并定容至刻度，配制成1.0mg/mL纳洛酮标准储备溶液。密封，置于冰箱中冷冻保存，保存时间12个月；

2)2μg/mL纳洛酮标准工作溶液：移取1.0mg/mL纳洛酮标准储备溶液适量至容量瓶中，加入甲醇稀释，混匀，配制成2μg/mL内标纳洛酮标准工作溶液。密封，置于冰箱中冷藏保存，保存时间3个月。

5.2仪器和材料

仪器和材料包括：

a)液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）；

b)电子分析天平：感量0.1mg；

c)涡旋振荡器；

d)离心机；

e)恒温水浴锅；

f)移液器。

6操作方法

6.1定性分析

6.1.1样品前处理

6.1.1.1案件样品

6.1.1.1.1血液、尿液样品

移取血液或尿液0.4mL，加入乙酸乙酯3mL，涡旋混合，以2500r/min离心3min，将上清液转移至另一试管中，在60℃水浴空气流下吹干，残留物用混合溶液〔甲醇:20mmol/L乙酸铵溶液(体积比33:67)〕100μL复溶，供仪器分析。

6.1.1.1.2组织样品

称取剪碎组织0.4g，加入乙酸乙酯3mL，涡旋混合，以2500r/min离心5min，将上清液转移至另一试管中，在60℃水浴空气流下吹干，残留物用混合溶液〔甲醇:20mmol/L乙酸铵溶液(体积比33:67)〕100μL复溶，复溶液置于1.5mL离心管中，-20℃冷冻过夜，次日以13000r/min离心3min，取上清液于进样小瓶中，供仪器分析。

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6.1.1.2控制样品

取等量相同基质空白样品两份，一份作为空白样品，一份添加0.2μg/mL的雷公藤甲素和雷公藤酯甲标准工作溶液10μL，作为添加样品，余下同6.1.1.1.1或6.1.1.1.2，与案件样品平行操作。

6.1.2仪器检测

6.1.2.1仪器条件

6.1.2.1.1液相色谱条件

以下条件作为参考，可根据不同仪器实际情况进行调整：

a)色谱柱：RestekAllure?PFPPropyl五氟苯基柱（或其它等效柱），100mm2.1mm，5μ