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水中嗜肺军团菌检验方法酶底物定量法
1范围
本文件描述了水中嗜肺军团菌酶底物定量检验法。
本文件适用于冷却水、冷凝水和沐浴用水中嗜肺军团菌的检验，其他水质检验可参考本文件进行。本方法定量限为1MPN/100mL。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T18204.5公共场所卫生检验方法第5部分：集中空调通风系统
GB/T18204.6公共场所卫生检验方法第6部分：卫生监测技术规范
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
嗜肺军团菌LegionellaPneumophila
军团菌目、军团菌科、军团菌属中的一种杆菌。
注：菌体大小为（0.3～0.4）μm×（2～3）μm。无荚膜，无芽孢，有端生鞭毛，革兰染色阴性，常呈梭形，需在含L-半胱氨酸、铁离子等营养成分的培养基中生长。
3.2
最可能数mostprobablenumber；MPN
稀释培养计数
一种基于泊松分布的间接计数方法。
注：利用统计学原理，根据一定体积不同稀释度样品经培养后产生的目标微生物阳性数，查表估计一定体积样品中目标微生物存在的数量（单位体积存在目标微生物的最可能数）。
4方法原理
该方法基于一种细菌酶检验技术，嗜肺军团菌利用培养基中丰富的氨基酸、维生素和其他营养物质迅速地生长，经分解代谢作用与培养基中的酶底物发生反应使溶液浑浊或显褐色。
5培养基与试剂
5.1酶底物法培养基
5.1.1成分
N-氨基甲酰甲基乙磺酸缓冲液（ACES）10.0g
酵母膏3.5g
硫酸镁0.35g
α-酮戊二酸1.05g
丙酮酸钠0.45g
3
氨基酸
硫代硫酸钠
二氯化锰
抗生素
4.70.007 0.030.35
g
g
g
g
5.1.2制法
将以上成分按比例溶解在1000mL无菌水中，121℃高压灭菌15min。
5.2预处理液的配制
称取2.04g雷伯环衍生物有机酸加入100mL无菌水中混匀。
5.3硫代硫酸钠溶液的配制
称取26g硫代硫酸钠（Na2S2O3?5H2O）溶液（或16g无水硫代硫酸钠），溶于1L水中，并加热煮沸10min，冷却，过滤后避光备用。
5.4BCYE培养基
5.4.1成分
N-2-乙酰氨基-2-酰氨基乙烷磺酸（ACES）缓冲液10.0g
氢氧化钾2.8g
活性炭2.0g
酵母提取物（细菌级）10.0g
α-酮戊二酸钾盐1.0g
琼脂12.0g
L-半胱氨酸盐酸盐-水合物0.4g
焦磷酸铁（III）0.25g
水1000mL
5.4.2制法
5.4.2.1将0.4gL-半胱氨酸盐酸盐-水合物加到10mL水中。通过孔径为0.22μm的膜过滤器过滤，对溶液进行过滤灭菌。
5.4.2.2将0.25g焦磷酸铁（III）加到10mL水中。通过孔径为0.22μm的膜过滤器过滤，对溶液进行过滤灭菌。
5.
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