紫外可见分光光度计原理及操作.ppt

3）光度值不正常检查项目处理方法在测量参数中误选了“自动调零”（样品室中的样品设置为0吸光度）移走样品，重新选择“自动调零”。波长设定不对应设定合适的波长样品预处理不好正确进行样品的预处理。用不合适的池玻璃池在紫外区域不透光，应改用石英池。故障修理第32页,共33页，5月，星期六，2024年，5月感谢大家观看第33页,共33页，5月，星期六，2024年，5月关于紫外可见分光光度计原理及操作一、紫外-可见分光光度计仪器原理第2页,共33页，5月，星期六，2024年，5月g-X-射线紫外可见红外微波无线电2004008003200(nm)波长真空紫外近红外核磁共振波长越短，能量越高原理第3页,共33页，5月，星期六，2024年，5月1）分子吸收光谱的形成过程：运动的分子外层电子----吸收外来外来辐射----产生电子能级跃迁---分子吸收谱。2）由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构，其吸收光能量的情况也就不会相同。因此，每种物质就有其特有的、固定的吸收光谱曲线，可根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低判别或测定该物质的含量，这就是分光光度定性和定量分析的基础。3）紫外分光光度法使用基于朗伯-比耳定律(Lambert－Beer)。朗伯-比耳定律是光吸收的基本定律，俗称光吸收定律，是分光光度法定量分析的依据和基础。原理第4页,共33页，5月，星期六，2024年，5月入射光I0透射光I光程长b一、透射率T%?透射率T%=II0×100%朗伯-比耳定律第5页,共33页，5月，星期六，2024年，5月当入射光波长一定时，待测溶液的吸光度A与其浓度和液层厚度成正比，即k为比例系数，与溶液性质、温度和入射波长有关。?当浓度以g/L表示时，称k为吸光系数，以a表示，即?当浓度以mol/L表示时，称k为摩尔吸光系数，以?表示，即?比a更常用。?越大，表示方法的灵敏度越高。?与波长有关，因此，?常以??表示。朗伯-比耳定律第6页,共33页，5月，星期六，2024年，5月二、紫外-可见分光光度计结构及类型第7页,共33页，5月，星期六，2024年，5月UV示意图第8页,共33页，5月，星期六，2024年，5月紫外-可见分光光度计仪器由光源、单色器、吸收池、检测器和数据系统五部分组成。一、光源对光源基本要求：足够光强、稳定、连续辐射且强度随波长变化小。1.钨及碘钨灯：340~1500nm，多用在可见光区；2.氢灯和氘灯：160~375nm，多用在紫外区。二、单色器(Monochromator)在UV-Vis光度计中，单色器通常置于吸收池的前面（可防止强光照射引起吸收池中一些物质的分解）仪器结构第9页,共33页，5月，星期六，2024年，5月三、吸收池(Cell，Container)：用于盛放样品。可用石英或玻璃两种材料制作，前者适于紫外区和可见光区；后者只适于可见光区。有些透明有机玻璃亦可用作吸收池。四、检测器：硅光电池、PMT、PDA五、数据系统它的作用是放大信号并以适当方式指示或记录下来。现在一般的紫外可见分光光度计有计算机控制和主机单片机控制两种类型，功能基本类似。仪器结构第10页,共33页，5月，星期六，2024年，5月紫外-可见分光光度计的类型很多，但可归纳为三种类型，即单光束分光光度计、双光束分光光度计和比例双光束分光光度计。1.单光束分光光度计经单色器分光后的一束平行光，轮流通过参比溶液和样品溶液，以进行吸光度的测定。这种简易型分光光度计结构简单，操作方便，维修容易，适用于常规分析。类型第11页,共33页，5月，星期六，2024年，5月2.双光束分光光度计经单色器分光后经反射镜分解为强度相等的两束光，一束通过参比池，一束通过样品池。光度计能自动比较两束光的强度，此比值即为试样的透射比，经对数变换将它转换成吸光度并作为波长的函数记录下来。双光束分光光度计一般都能自动记录吸收光谱曲线。由于两束光同时分别通过参比池和样品池，还能自动消除光源强度变化所引起的误差。类型第12页,共33页，5月，星期六，2024年，5月3.比例双光束分光光度计由同一单色器发出的光被分成两束，一束直接到达检测器，另一束通过样品后到达另一