血涂片及骨髓涂片的制片与读片 .pdfVIP

血涂片及骨髓涂片的制作与读片

潘志强

2006-3-30

实验准备

一．器材：

载玻片：每只动物一块

盖玻片：每只动物一块

滴管：4个

橡皮吸头：4个

中号镊子：4把

大剪刀：4把

眼科镊：4把

玻璃棒：4根

烧杯：1000ml，2个

量筒：100ml、500ml、1000ml各一

蜡笔

棕色小口瓶

碾钵

载玻片处理：一般将载玻片先用洗衣粉水溶液煮沸20分钟，用流水冲洗，再经清洁液浸

泡过夜，用流水反复冲洗，最后入95%酒精浸泡约1小时。取出，以洁净布巾夹持玻片边缘擦

干备用。

二．试剂：

瑞氏染液240ml

瑞氏染料粉剂0.1g

纯甲醇（AR）60ml

将粉剂放入洁净干燥碾钵内，先加少量甲醇研磨使染料溶解，然后将已溶解的染料倒入洁

净的棕色玻璃瓶内，剩下未溶解的再加入少量甲醇研磨，如此反复，直至染料完全溶解为止。

新配制的染液需密封保存，室温放置1周后才能使用。染料存放越久，染色效果越好。

磷酸盐缓冲液

1%KHPO30ml

24

1%NaHPO20ml

24

加蒸馏水至800ml，调PH值到6.5~7.0，定容至1000ml。

甲醇

鸡蛋清：蒸馏水与鸡蛋清按1/1的比例稀释。

中性树胶：如果中性树胶过于粘稠，可将中性树胶与二甲苯按7/3的比例稀释。

二甲苯

1

实验步骤

一．涂片

（一）血液涂片的制作

（1）需载玻片2张，分别称为玻片1和玻片2（推片）。

（2）用玻片1一端接约3mm直径的血滴，将此玻片1保持水平。

（3）取另一边缘平整的载玻片2（推片），将其前端放在血滴前，与片1保持30°角并稍向后

移与血滴接触，即见血液沿片2（推片）下缘散开，使血液展开并充满整个推片的宽度。

（4）立刻将推片与载玻片呈30°角，边轻压推片边将血液按下图的箭头方向推动涂抹，至血

液铺完血膜为止。

（5）挥动片1使血膜吹干，用蜡笔将血膜边缘圈画备染色。

（6）每只动物涂片一张。

（7）一张良好的血片，要求厚薄适宜，头、体、尾分明。

（8）置30min～1hr后较利于观察红细胞的形态。

注意事项：

如标本本身太短，可观察的部分会受局限，故以在离开载玻片另一端2cm地方涂抹为宜。

载玻片、推片的角度越小、血液越薄；涂抹速度越慢、也越薄。在涂抹贫血病人的血液时，将推片稍竖起（不

是30°而是35°～40°左右），以较快的速度推比较好，而对红细胞增高的病人则相反。

如用力过猛白细胞容易破损。

（二）骨髓涂片的制作

用手术剪刀剪掉大腿部的肌肉，充分暴露股骨，再用大剪刀从上端剪断第2股骨，用中号

镊子夹股骨以挤出骨髓，如果骨髓不易取出，可用直头眼科镊插入骨髓腔挑出骨髓，置骨髓于

一载玻片上，由于骨髓液的纤维蛋白原含量较高，易于凝固，可先在骨髓液内加5~10倍的稀

释后鸡蛋清，充分混匀，取1滴至另一载玻片上，涂片。涂片方法同血液涂片，但推片要快并

迅速使之干燥。每只动物涂片一张。

二．染色

（一）血液涂片的染色

（1）将待染涂片平放于染色架上。

（2）用滴管将染液滴于涂片上，覆盖整张涂片，放置1～3分钟。

（3）加入等量的磷酸缓冲液或蒸馏水，与染液混匀，可以用滴管从一端吸入，另一端放出，

混匀为止，或用嘴来回轻轻吹之，使之混匀，室温下染色5～10分钟（白细胞数多或骨

髓标本时间应长一些，如