藤梨根乙醇提取物联合CIK 细胞对胃癌细胞SGC-7901 杀伤作用的讨论.pdfVIP

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藤梨根乙醇提取物联合CIK细胞对胃癌

细胞SGC-7901杀伤作用的讨论

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如意！

中医药和生物治疗作为晚期胃癌的辅助疗法，既

能提高化放疗的近、远期疗效，又能减轻其不良反应，

所以在晚期胃癌的治疗中必不可少。CIK细胞治疗是

发展最为迅速的过继免疫疗法，其疗效在国际上己得

到广泛认可。藤梨根最早见于《开宝本草》，又名猕猴

梨根、猕猴桃根或阳桃根，为猕猴桃科软枣猕猴桃的

根。《青岛中草药手册》言：性平，味甘、微酸。入足

少阴、阳明经。具有健胃、清热解毒和利湿的功效，

适用于湿热黄疸和消化不良等症。并擅长祛风除湿、

消痈医疡和活血利尿消肿，治疗风湿痹痛、关节肿痛、

淋浊带下、瘰疬、痢疾、疮疖和水肿等症，有抗癌作

用，主要用治胃癌和食管癌等消化道癌肿。相关研究

已证实藤梨根和CIK细胞单独作用胃癌细胞均有直接

杀伤和诱导凋亡的作用。在相似的抗肿瘤机理前提下，

如何发挥各自的优势，最大限度地抑瘤杀瘤，值得深

究。本研究以抗肿瘤中药藤梨根为例，初步探讨其乙

醇提取物与CIK细胞在体外联合对胃癌细胞

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SGC-7901生长的影响，为两者联合运用奠定理论基

础。

1材料

主要仪器及试剂

主要仪器：CO2细胞培养箱(日本SANYO公

司)、倒置显微镜XSD-1(重庆光学仪器厂)、酶标仪

SkanAscent(美国thermo公司)。试剂：注射用重组

人干扰素-γ(上海凯茂生物医药有限公司，批号：

、注射用重组人白介素-2(山东泉港药业有

限公司，批号：、重组人白介素1α(美国

PeproTechECLtd公司)、注射用抗人T细胞CD3鼠

单抗(武汉生物制品研究所，批号：、

RPMI1640(GIBCO公司，批号：22409-015)、二甲亚

砜(DMSO)(美同Sigma公司，批号：D4540-500ML)、

四甲基偶氮唑盐(MTT)(美国Sigma公司，批号：

CGD-17H294，以超纯水配成5mg/ml，避光、分装保

存)、胰蛋白酶(Tripsin)(Difco公司，批号：215250)、

胎牛血清、冷乙醇、PI。

细胞株

本研究中使用的胃癌细胞SGC-7901购自科学院

细胞库，长期冻存于-196℃液氮或短期存放于-80℃冰

箱中。用前取出溶解，常规培养于含10%胎牛血清的

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RPMI1640完全培养液内，置于37℃、5%CO2的培

养箱中培养。取第3、4代对数增长期的细胞用于试

验。

中药

将购置的藤梨根乙醇提取物粉末1g加DMSO2

ml溶解得到生药浓度500mg/ml，分装后置4℃冰箱

冷藏备用。临用前用含10%胎牛血清的完全培养液

稀释到所需的工作浓度。CIK细胞

CIK细胞的制备参照相关文献，用淋巴细胞分离

液离心提取20例健康人的外周血单个核细胞

(PBMC)1～2×107个，PBS洗涤后，将细胞重悬并

保存于由血清、谷氨酰胺、链霉素和青霉素所组成的

RPMI1640培养液内，调整密度2×106个/ml，开始

时加入×106U/L的IFN-γ，孵箱中培养24h后，加入

100μg/L的抗CD3McAb、5×105U/L的IL-2和×105

U/L的IL-1α。继续培养，以后每2～3d换液，同

时补加IL-2，调整为×106个/ml，分别于培养初始第