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沉淀蛋白质的常用方法〈TCA、乙醇、丙酮沉淀蛋白操作步骤)
TCA-DOC
ForprecipiationofvemomProteaconcentratiom
1)Toeonevolumeofproteinsolution,add17100vol.of2旬DOC(Nadeoxycholate，
detergent).
2)Vortexandletsitfor30minat4oC-
3)Add1/10ofTrichloroaceticacid(TCA)100%vortexandletsitONat4oC
《preparationof100%TCA:454mlH2OAkgTCA.Maintainindarkbottleat4oC.Be
careful,usegloves10.
4)Spin15min4oCinmicrofugeatmaximumspeed(15000g).Carefullydischarge
supernatantandretainthepellet:drytubebyinversionontissuepaper(pelletmaybe
difficulttoseej.OPTION:WasPelettwiceWionevonieofcoidacetone
(facefonekeepaf-200C)VorrexendrepeilersamtpfesSi71speedpephpee
TWOG5Pes了
5)Drysamplesundervaccum(speedvac)ordryairForSDS,resuspend
samplesinaminimalvolumeofsamplebuffer,(ThepresenceofsomeTCAcangive
ayellowcolourasaconsequenceoftheacidificationofthesamplebuffer;titrate
withINNaOHor1IMTrisHCIPH8.5toobtainthenormalbluesamplebuffercolour.)
NormalTCA
7pelipaipale7CAsofipieiniererencesGadproleincoHCeFHra1EOR
DToasampleofproteinsolutionaddTrichloroaceticacid(TCA)1009%toget13%
finalconcentration.Mixandkeep5min-20oCandthen15min4oC;orlongertimeat
4oCwithonutthe-20oCsteptorlowerproteinconcentration.Suggestion:leaveON这
theproteinconcentrationisvery]ow.
(Preparationof100%TCA:454mlH2OAkgTCA.Maintainindarkbottleat4oC.Be
careful,usegloves10.
2)]Spin1Smin4oCinmicrofugeatmaximumspeed(15000g).Carefullydischarge
supernatantandretainthepellet:drytubebyinyersionontissuePaper(Pelletmaybe
difficulttoscc).
3)ForSDS,resuspendsamplesinaminimalvolumeofsamplebuffer.(The
PresenceofsomeTCAcangiveayellowcolourasaconsequenceoftheacidification
ofthesamplebuffer;titratewith1NNaOHor1MTrisHCIpH8.stoobtainthe
normalbluesamplebuffercolour.
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