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2158核农学报2023，37（11）：2158~2165

JournalofNuclearAgriculturalSciences

文章编号：1000‑8551（2023）11‑2158‑08

非生物胁迫诱导的棉花酵母双杂交文库构建及

GhJAZ1互作蛋白筛选

蔡肖李兴河王海涛刘存敬唐丽媛张素君张建宏*

（河北省农林科学院棉花研究所/农业农村部黄淮海半干旱区生物学与遗传育种重点实验室/国家棉花改良中心河北分中心，

河北石家庄050051）

摘要：非生物胁迫导致棉花生长发育受到抑制，严重影响棉花的产量和品质。为了深入探究棉花非生

物逆境响应的分子作用机制并鉴定GhJAZ1的互作蛋白，本研究以陆地棉标准系TM-1为材料，采用

Gateway重组技术构建了非生物胁迫诱导的陆地棉酵母双杂交cDNA文库，获得的初级文库总克隆数为

1.2×10CFU，次级文库总克隆数为1.6×10CFU，重组阳性率100%，酵母文库滴度为5.0×10cells·mL

777-1

，

酵母克隆平均插入片段1000bp，符合建库标准，可用于后续酵母双杂交筛选。以GhJAZ1为诱饵，构

建pGBKT7-GhJAZ1诱饵蛋白表达载体，经毒性检测及自激活活性检测，明确了诱饵质粒在酵母系统中

无毒性和自激活活性，可直接用于酵母文库筛选。利用酵母双杂交筛选构建的非生物胁迫诱导的酵母

cDNA文库，得到72个初筛阳性克隆，经测序、序列比对和酵母回转验证，获得11个与GhJAZ1相互作用

的候选蛋白。选取其中4个候选蛋白，利用酵母双杂交进一步确认了GhJAZ1与候选蛋白的相互作用关

系。本研究结果为深入分析棉花非生物胁迫响应的调控网络奠定了良好的基础，为解析GhJAZ1低温应

答分子机理提供了重要参考。

关键词：棉花；互作蛋白；酵母双杂交；非生物胁迫；GhJAZ1

DOI：10.11869/j.issn.1000‑8551.2023.11.2158

JAZ（JasmonateZIM-domain）蛋白作为E3泛素连接

棉花（Gossypium）是重要的经济作物之一。近年来，

蛋白降解复合体SCFCOI1的靶蛋白，是茉莉素（jasmonic极端天气等自然灾害频发，造成棉花生长环境和条件

acid，JA）信号转导途径中重要的转录抑制因子之

恶化，严重影响着棉花的产量和品质。棉花JAZ基因

［1-2］

一。JAZ蛋白不仅广泛参与植物生长发育、次生代谢的鉴定分析和功能研究相继被报道，为研究其在棉花

［3-4］［14-16］

物合成等生物学进程，而且在抵御生物及非生物胁生长及逆境响应中的作用机制提供了理论依据。