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如何做信号通路（SignalingPathway）

第一次做信号通路(SignalingPathway)，心中不免惴惴。对于这

方面实在是不懂。

请问一下如何证明该通路对细胞的作用，

阻断某个蛋白的目的是什么？是看这个通路上哪个蛋白对细胞的

影响大么？

还有阻断剂的应用，比如P38的，PD203580，ERK的SD。。

（忘了，不好意思）

如何应用于培养液中？

有哪些信誉好的足球投注网站了版面，很少关于这方面的，好像看到说溶于DMSO，这个

浓度是怎么确定的？

跟细胞密度有关系么？

不好意思，问题太多

请高手指点讨论！！谢谢！！

另外有个战友发信给我，我不记得你的地址了，你能再给我发一

下么？

1。阻断某个蛋白的目的是什么？是看这个通路上哪个蛋白对细胞

的影响大么？

阻断某个蛋白确实是为了看这个蛋白对细胞的影响，但这只能从

一个层面上反映该蛋白对细胞的影响，因为

（1）。这个蛋白可能在多个信号通路(SignalingPathway)中发

挥作用，可能有多条信号通路(SignalingPathway)被抑制

（2）。这个蛋白的抑制剂是否是特异性抑制剂？除了可以抑制该

蛋白是否可以抑制其他或者激活其他？

（3）。抑制该蛋白的抑制程度又如何？能完全抑制住还是在一定

程度上抑制？

（4）。同一抑制剂，不同的细胞反应可能不同，可能用了某个抑

制剂后细胞在整体上没什么变化，但信号通路(SignalingPathway)已

有改变，可能存在其他信号通路(SignalingPathway)的代偿

（5）。在用抑制剂的同时，可尝试用激动剂或过表达该蛋白，看

看细胞和信号通路(SignalingPathway)有何改变，更有说服力。

还有阻断剂的应用，如何应用于培养液中？

不同的抑制剂用法是不同的，建议先查文献，看看别人是如何用

该药物的，重点要看该药物的生产厂家、溶剂、使用浓度和使用方法

接着从生产厂家的网站查该药物的说明书

根据别人的使用浓度推断大概的药物浓度范围

购买药物后，用MTT等简单的方法，和先前确定的大概浓度范围

筛选出适用于你的细胞的浓度

好像看到说溶于DMSO，这个浓度是怎么确定的？

DMSO是溶剂，但不是所有药物都用DMSO来溶，常用的还有乙

醇、水等

要根据药物的说明书来定，生产厂家的网站上都有

在配药物母液的时候要配浓度很高的母液，因为最终加入到培养

液后溶剂浓度不能太高，否则就会出现溶剂的毒性作用，通常DMSO

的终浓度不超过千分之三，乙醇也是如此

想请问做某条信号通路(SignalingPathway)，是否必须要做阻断

才有说服力呢？如果知做WEATERN结果可以被接受吗？因为是刚接

触这个方面，所以很多问题都不明白。

western只能表示蛋白质水平的差别,如果想研究DNA,或RNA,那

么还需要做别的实验.

如果想说明一个物质的下游是否是另一个物质,那么必须要阻断,要

不没有办法说明的哦.

做信号通路(SignalingPathway)要反复验证，简单地说，阻断了

检测一下，恢复了再检测一下，增强了再检测一下

我老板常说一个很形象的例子：生了儿子的时候种下一棵树，树

长儿子也长，那么树和儿子是什么关系呢？没儿子的情况下树长不长？

没树的情况下儿子长不长？儿子长得快树是不是也长得快？树长的快

儿子是不是也长得快？

做信号通路(SignalingPathway)一定要从各个方面用不同的方法

反复论证才有说服力。就像证明充分必要条件一样，究竟什么是充分

条件，什么是必要条件，都需要严格论证。

WEATERN只是一种检测手段，看你要检测什么了。并不是所有

蛋白都可以用WEATERN来检测的，比如说检测PI3K磷酸化的水平，

就需要用专用试剂盒；有些蛋白可以用WEATERN