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禽流感病毒BEI灭活疫苗制备与免疫效果

施维松;陈瑞爱;张晓楠;詹烜子;唐兆新

【摘要】使用浓度为0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％和0.6％的二乙烯亚胺

(BEI)37℃灭活禽流感病毒(Re-5株)24h,经灭活效果检测BEI浓度≥0.5％可以完全

灭活病毒.0.5％的BEI和0.2％的甲醛灭活禽流感病毒,以相同配方制备疫苗,免疫效

力比较研究结果显示,按照规程要求免疫21d后采血HI效价分别为8.35log2和

7.66log2,BEI灭活疫苗的抗体水平要高于甲醛灭活疫苗.本研究为禽流感灭活疫苗

灭活工艺研究提供了依据.

【期刊名称】《中国兽医杂志》

【年(卷),期】2012(048)008

【总页数】3页(P21-23)

【关键词】禽流感病毒;BEI;灭活疫苗;免疫效果

【作者】施维松;陈瑞爱;张晓楠;詹烜子;唐兆新

【作者单位】广东省兽用生物制品生物工程技术研究与应用企业重点实验室,广东

肇庆526238;肇庆大华农生物药品有限公司,广东肇庆526238;广东省兽用生物制

品生物工程技术研究与应用企业重点实验室,广东肇庆526238;肇庆大华农生物药

品有限公司,广东肇庆526238;肇庆大华农生物药品有限公司,广东肇庆526238;肇

庆大华农生物药品有限公司,广东肇庆526238;广东省兽用生物制品生物工程技术

研究与应用企业重点实验室,广东肇庆526238;肇庆大华农生物药品有限公司,广东

肇庆526238

【正文语种】中文

【中图分类】S852.65+9.5

禽流感（AI）是由A型流感病毒引起的一种以侵害呼吸系统为主的疾病，是危害

禽类健康的重要传染病之一。该病给养禽业带来了巨大的经济损失，同时也对人类

健康带来严重威胁。AI的防控研究具有重要的经济学和公共卫生意义。

疫苗免疫是我国AI防控禽流感传播的重要途径。我国从20世纪90年代开始禽流

感病毒（AIV）灭活疫苗研究，其中H5N1亚型重组病毒株的AIV灭活疫苗已经

广泛应用，具有良好的免疫效果，在H5N1亚型禽流感的防控中起到了重要的作

用。国内的禽流感灭活疫苗的生产工艺中，灭活过程都是使用甲醛溶液作为灭活剂，

其灭活能达到很好的效果，但是甲醛灭活不仅灭活了病毒也破坏了病原体的免疫原

性，并且甲醛灭活时间比较长，易受温度、pH值、浓度、是否存在有机物、病原

体的种类和含氮量等因素影响，残留的游离甲醛，若随疫苗注入机体后，会产生应

激性反应。所以需要寻找更加安全可靠的灭活剂进行病毒的灭活。BEI是一种烷化

剂，对病毒具有很强的灭活作用，其作用原理是破坏微生物核酸，而不影响其蛋白

质成分，并保持病毒抗原性［1-2］。本试验通过使用不同终浓度的BEI和不同的

灭活时间、温度对AIV进行灭活，确定BEI的灭活条件，并制备疫苗进行免疫试

验，结果表明，该灭活苗安全、可靠，其免疫原性明显优于甲醛灭活疫苗。

1材料与方法

1.1抗原禽流感H5N1亚型（Re-5株）抗原由肇庆大华农生物药品有限公司生产；

禽流感H5N1亚型（Re-5株）诊断抗原，购自中国农业科学院哈尔滨兽医研究所。

1.2试验动物与鸡胚3～4周龄SPF鸡及10日龄鸡胚，均购自新兴大华农禽蛋有

限公司SPF实验动物中心。

1.3主要试剂二乙烯亚胺（BEI），购自TCI公司；硫代硫酸钠，购自Alfa公司；

PrimeScript1stStrandcDNASynthesisKit、RNAisoplus总RNA提取试剂、

dNTP和ExTaq，均购自TaKaRa公司；PCR引物由Invitrogen公司合成。

1.4BEI的配制用0.2mol／LNaOH溶液配制浓度为0.1mol／LBEI溶液［3］。

1.5抗原灭活在负压生产区，根据病毒液的量分别加入终浓度为0.1%、0.2%、

0.3%、0.4%、0.5%和0.6%的BEI，至于37℃恒温摇床中（120r／min），分别

灭活1，2，4，8，12，18，24h后，加BEI用量10%硫代硫酸钠终止反应。

1.6灭活效果检测灭后样品按照生产规程灭活检验要求接SPF鸡胚，孵育后72h

检测血凝价，并盲传一代，检测血凝价。

1.7血凝（HA）试验取灭活前后的病