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鸡传染性贫血病毒vp3基因在真核细胞中的表达与功能分析

黄超华;张全红;陈坤;王永强;曹红;李晓齐;郑世军

【摘要】为研究鸡传染性贫血病毒(CIAV)VP3蛋白在宿主细胞中的作用,本研究采

用PCR技术从CIAVDNA中扩增出vp3基因,并将该基因克隆到pMD18-T

simplevector中.经测序证实所克隆的vp3基因与CIAVCUX-1标准株相同.并将

vp3基因亚克隆到真核表达载体pEGFP-N1中,构建了重组真核表达质粒pEGFP-

vp3与pCMV-Mycvp3,转染BHK-21和293T细胞,经RT-PCR、荧光显微镜以及

WesternBlot证实转染的真核细胞能够表达VP3蛋白.以台盼蓝染色法检测细胞

死亡,结果表明,VP3蛋白具有较强诱导细胞死亡的作用.该结果为深入研究CIAV的

致病机理奠定了基础.

【期刊名称】《中国兽医杂志》

【年(卷),期】2015(051)007

【总页数】4页(P7-10)

【关键词】鸡传染性贫血病毒;VP3基因;凋亡素;真核表达

【作者】黄超华;张全红;陈坤;王永强;曹红;李晓齐;郑世军

【作者单位】中国农业大学动物医学院,北京海淀100193;蛇口出入境检验检疫局,

广东深圳518054;国家知识产权局专利局专利审查协作北京中心,北京海淀

100190;中国农业大学动物医学院,北京海淀100193;中国农业大学动物医学院,北

京海淀100193;中国农业大学动物医学院,北京海淀100193;中国农业大学动物医

学院,北京海淀100193;中国农业大学动物医学院,北京海淀100193

【正文语种】中文

【中图分类】S852.65

鸡传染性贫血病毒（CIAV）作为鸡传染性贫血（CIA）的病原，主要引起感染鸡

再生障碍性贫血和雏鸡的免疫抑制，继而引发其他病原发生继发感染。该病毒在世

界范围内广泛分布，对养鸡业是一种潜在的巨大威胁。

鸡传染性贫血病毒（CIAV）属于圆环病毒科。Noteborn等人于1991年对CIAV

的全基因组进行了分析，发现其长度为2.3kb，含3个开放阅读框架（ORF），

分别编码VP1、VP2、VP3等3种病毒蛋白[1]。VP3作为CIAV的非结构蛋白，

是CIAV最主要的致病因子，能够诱导感染雏鸡骨髓造血细胞及胸腺的前T细胞凋

亡[2]，从而导致雏鸡出现严重的出血、贫血及免疫抑制。同时，研究证实，VP3

能选择性地诱导人转化细胞和肿瘤细胞凋亡，而对正常二倍体细胞无毒害作用[3]。

因为这种特性，VP3成为抗肿瘤药物的研究热点，被命名为“Apoptin”。研究

表明，VP3诱导的肿瘤细胞凋亡不需要肿瘤抑制因子p53的介导[4]，但依赖于

caspase的参与，尤其是caspase-3的活化[5]。除此之外，人们通过各种技术手

段找到了一些可能参与Apoptin凋亡过程的蛋白，如孙敬国[6]等发现，ABP280、

NMI、UPH和MYB等结合蛋白可以与Apoptin结合；Cheng[7]等也筛选

到了几种与Apoptin相互作用的蛋白，其中包括APAPI和Hippi等。这些蛋白都

可能参与了Apoptin诱导的细胞凋亡过程。但是，Apoptin诱导细胞凋亡的具体

途径仍不清楚，需要进一步的研究。本研究成功克隆到CIAVvp3基因并成功构建

出真核表达载体pEGFP-VP3。后者可以在293T和BHK-21细胞中瞬时表达

VP3蛋白，并能诱导细胞死亡，为深入研究CIAV的致病机理奠定了基础。

1材料与方法

1.1CIAV病毒毒株与细胞CIAV病毒Cux-1标准株由北京市农林科学院杨兵副研

究员提供，293T和BHK-21细胞由本实验室保存。

1.2主要试剂TaqplusDNA聚合酶、质粒小量提取试剂盒、DNA回收试剂盒，

购自北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司；感受态细胞E.coliDH5α、DNA

Marker，购自北京天为时代生物公司；限制性内切酶、pMD18-Tsimple连接试

剂盒，购自宝生物工程（