抗体的制备（免疫学检验技术课件）.pptx

抗体的制备

抗体的制备抗体的类型及制备方法1、多克隆抗体（PcAb）→免疫动物AgAb

抗体的制备抗体的类型及制备方法2、单克隆抗体（McAb）→杂交瘤技术3、基因工程抗体（GeAb）→基因工程技术AgAb

免疫原的制备免疫学检验技术

免疫原的制备免疫原的制备类型1）人工抗原的制备2）颗粒性抗原的制备（绵羊红细胞/细菌）3）可溶性抗原的制备（蛋白质）

设计情景提问免疫原的制备一位今天注射了青霉素的患者，抽血查血常规，血液静置一段时间后，血细胞发生沉降，请问血液中的血细胞、血浆中的白蛋白、血浆中的青霉素小分子各自属于哪一种抗原？A、颗粒性抗原；B、可溶性抗原；C、半抗原

提问免疫原的制备上述三种抗原中：1）哪一种没有免疫原性？要想具有免疫原性，怎么改造？2）最常用的载体是什么？一个载体上连接多少个半抗原才有好的启动能力？3）三种抗原中，哪一种的免疫原性最强？答案：1）半抗原，加载体可转变为完全抗原；2）牛血清白蛋白，20个以上；3）颗粒性抗原。

提问免疫原的制备抽取绵羊血液时，下列四种盛血容器，哪一种用来盛装血液最合适？

免疫原的制备绵羊红细胞制备采集新鲜绵羊红细胞注入无菌并带有玻璃珠的三角烧瓶内，充分摇动15分钟后除去纤维蛋白，再以无菌生理盐水洗涤3次，最后配成1×106/ml浓度的细胞悬液，即可应用。

免疫原的制备细菌抗原制备细菌抗原有菌体抗原和鞭毛抗原等，多选用典型菌株的液体或固体培养物经集菌后处理。鞭毛抗原需用有动力的菌株，菌液用0.3％～0.5％甲醛处理，而菌体抗原则需要在100℃加温2～2.5小时后应用。（伤寒杆菌菌体抗原→“O”抗原；伤寒杆菌鞭毛抗原→“H”抗原。）

情景设计免疫原的制备假设现在需要提取鸡肝细胞里面的A蛋白（500KD），配成一定浓度作为抗原，从给定的三种动物（鸭、兔、山羊）中选择合适的动物在实验室里免疫，一段时间后采血，分离血清，若得到抗体，从中提取出Ab1，并鉴定其效价和纯度，最后选一个最好的方法保存起来。步骤：制备可溶性抗原（鸡A蛋白）→免疫动物→采血→提取、纯化、鉴定Ab1→保存Ab1

免疫原的制备可溶性抗原制备（1）组织匀浆的制备（高速捣碎法、研磨法）清洗鸡肝脏、去除杂质→粉碎肝组织成匀浆（糊状）→离心，取上清液。（2）破碎细胞（方法：反复冻融法、超声破碎法、溶菌酶处理法、自溶法、表面活性剂处理法）

免疫原的制备可溶性抗原制备（3）提纯A蛋白方法1：超速离心法（比重不同）方法2：选择性沉淀法（如盐析沉淀法溶解度不同）方法3：凝胶过滤（分子大小不同）方法4：离子交换层析（电荷不同）方法5：亲和层析（抗原抗体结合具有特异性）方法6：电泳法（大小、形状、带电量不同）

情景设计提问免疫原的制备假设杯子中有三种蛋白，A最小（比重：1.001），C最大，B（比重：1.007）比A稍大，怎样选择超速离心法对此三种蛋白进行初步分离？第一步：超速离心（分离大小相差大），上层A+B，下层为C；第二步：密度梯度离心（分离大小相差不大），需用分层液（如比重：1.005）

提问免疫原的制备怎样用盐析沉淀法粗提血清中的IgG类抗体？将待提取的血清倒入50%饱和度的硫酸铵溶液中，血清中的白蛋白发生沉淀，吸出上清液，将上清液加入33%饱和度的硫酸铵溶液中，其中的IgG可发生沉淀。弃掉上清液，将沉淀复溶除盐，即可获得部分纯化的IgG类抗体，完成粗提。动画：盐析沉淀法粗提IgG类抗体

情景设计提问免疫原的制备杯子里有待分离的两种圆形抗原，分子量大的为Ag1，分子量小的为Ag2。此处有一个分离柱，里面填满了圆形多孔凝胶小球，多孔凝胶上的小孔只能容纳Ag2进入，Ag1分子量大，不能进入。在分离柱下方出样口处准备一个杯子，将含两种不同抗原的液体从柱子进样口倒入柱内，并用液体冲洗，Ag1和Ag2谁先出来呢？动画：凝胶过滤纯化抗原

情景设计提问免疫原的制备杯子里有待分离的两种分子量相同的圆形抗原，分别是Ag1和Ag2，Ag1带五个正电荷，Ag2带一个正电荷。此处有一个分离柱，里面填满了圆形凝胶小球，每个凝胶小球上都带有负电。在分离柱下方出样口处准备一个杯子，将含两种不同电荷的抗原液从柱子进样口倒入柱内，并用液体冲洗，Ag1和Ag2谁先出来呢？动画：离子交换层析纯化抗原

情景设计提问免疫原的制备杯子里有待分离的两种抗原，分别是Ag1和Ag2，Ag1为三角形，Ag2为圆形。此处有一个分离柱，里面填满了圆形凝胶小球，每个凝胶小球上都包被有针对Ag1的相应抗体。在分离柱下方出样口处准备一个杯子，将含有两种不同抗原的液体从柱子进样口倒入柱内，并用液体冲洗，Ag1和Ag2谁先出来呢？动画：亲和层析纯化抗原

免疫原的制备可溶性抗原鉴定/保存（4）A蛋白