抗原抗体反应的类型之金免疫技术（免疫学检验技术课件）.pptx

胶体金和免疫金的制备

金免疫技术金免疫技术：是固相膜免疫分析技术的一种，是以胶体金作为标记物，标记已知抗原或抗体，用于检测未知抗体或抗原的一种检测方法。特点：简便、快速、安全、应用广泛、适合急诊；本法灵敏度不及酶标法，不能准确定量，只能作为定性或半定量试验。胶体金和免疫金的制备

胶体金和免疫金的制备胶体金1、又称金溶胶，为金盐还原后的金颗粒悬液。2、胶体金结构：一个基础金核（原子金Au）及包围在外的双离子层构成，内层负电荷（AuCL2-），外层正电荷（H+）。

胶体金和免疫金的制备胶体金3、胶体金颗粒大小为1-100nm，大小不同呈色不同。（2-5nm为橙黄色、10-20nm为酒红色、30-80nm为紫红色）4、对电解质敏感，某些蛋白质等大分子物质有保护胶体金、加强其稳定性的作用。5、引起胶体聚沉的主要因素包括电解质、温度和浓度等。

提问生活中的金子有哪些颜色？下图中的胶体金是紫红色的，你知道它是多少nm大小的颗粒吗？1）2-5nm胶体金颗粒→橙黄色2）10-20nm胶体金颗粒→酒红色3）30-80nm胶体金颗粒→紫红色胶体金和免疫金的制备

提问为什么蛋白质分子能增加胶体金的稳定性？蛋白质分子是胶体，带电，可抵抗一定的电解质作用。胶体金和免疫金的制备

胶体金和免疫金的制备胶体金制备1、制备原理：胶体金是氯金酸在还原剂（如柠檬酸钠、鞣酸等）作用下聚合成的一定大小的金属颗粒，进而形成带负电荷的疏水胶溶液。依据还原剂的类型和作用的强弱，可制备0.8-150nm大小不等的胶体金。2、制备方法：目前最常用的方法是使用柠檬酸三钠做还原剂的制备方法。

胶体金和免疫金的制备胶体金制备1、注意事项：氯金酸干燥避光保存；使用氯金酸时避免接触金属器具；制备胶体金时使用高质量去离子水；玻璃容器使用硅化玻璃；胶体金制备20天内进行标记。2、鉴定：指标包括粒径大小、均一程度、有无颗粒凝集等。良好的胶体金清亮透明。

金颗粒优质金颗粒劣质金颗粒胶体金和免疫金的制备

胶体金和免疫金的制备免疫金制备1、制备原理：免疫金是抗原或抗体与胶体金的结合物质。目前认为，这种结合是蛋白质表面携带的正电荷与胶体金颗粒表面的负电荷借静电吸附而形成的牢固结合。2、制备过程：蛋白溶液逐滴加入胶体金溶液中，同时用磁力搅拌，数分钟后加入稳定剂。3、保存：免疫金溶液使用稀释液调制成工作浓度后保存。

金标抗体的制备1、碱性溶液中金颗粒带负电。2、金颗粒上的负电与抗体上的正电荷结合（静电结合）形成金标抗体。胶体金和免疫金的制备

胶体金免疫层析技术

提问胶体金免疫层析技术ELISA中用于检测抗原的双抗体夹心法和竞争法的原理模式图怎样绘制？左图：双抗体夹心法右图：竞争法

胶体金免疫层析技术金免疫层析试验（以双抗体夹心法检测尿液中的HCG为例）1、标本：待测尿液2、试剂盒组成：试纸条带微视频：尿HCG检测

胶体金免疫层析技术金免疫层析试验（以双抗体夹心法检测尿液中的HCG为例）3、操作步骤：将试纸条插入尿液中2～5s。（不超过“最大线”）4、结果观察：上方出现一条红色线条为阴性；出现两条红色线条为阳性；上方不出现线条，不论下方是否出现线条为失效。（在试剂盒规定时间内）

胶体金免疫层析技术金免疫层析试验结果分析

胶体金免疫层析技术金免疫层析试验原理将各种反应试剂分点固定在试纸条上，检测标本滴加在试纸条的一端，通过层析作用使样品在层析材料上泳动，样品中的待测物与试纸条上的试剂发生特异性结合反应，形成的复合物被富集或固定在层析条上的特定区域（检测线），无关物则越过该区域而被分离，通过胶体金的呈色条带判读实验结果。

胶体金免疫层析技术金免疫层析试验原理AGTCBA、B两端：吸水材料；G处：胶体金结合物；T处：已知的抗体；C处：抗免疫金抗体，T、C点物质常以直线的形式包被在膜上。动画：免疫层析试验双抗体夹心法测尿HCG的原理

胶体金免疫层析技术金免疫层析试验原理微视频：丙型肝炎病毒抗体检测（胶体金法）

胶体金免疫层析技术金免疫层析试验类型（1）双抗体夹心法测抗原（2）竞争法测抗原

胶体金免疫渗滤技术

提问胶体金免疫渗滤技术ELISA中最常用于检测抗原和抗体的类型分别是哪一种？如果将标记物换成胶体金，原理模式图该怎样绘制呢？左图：双抗体夹心法右图：间接法

胶体金免疫渗滤技术金免疫渗滤试验（以间接法检测血清中抗核抗体（ANA）为例）1、标本：待测血清2、试剂盒组成：胶体金反应板、胶体金标记抗体、洗涤液微视频：抗核抗体（ANA）IgG检测（胶体金法）

胶体金免疫渗滤技术金免疫渗滤试验（以间接法检测血清中抗核抗体（ANA）为例）3、操作步骤：1）小孔内滴加待测