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重组人角质细胞生长因子-2基因的克隆、表达及活性

田海山;唐禄;王晓杰;王艳芳;官丽莉;李校堃

【摘要】从人胚肺成纤维细胞中提取总RNA,利用RT-PCR法获得人角质细胞生

长因子-2(hKGF-2)cDNA,并通过PCR方法扩增,再与原核表达载体pET3c连接后

转化至BL21(DE3)宿主细胞中获得表达菌株.通过流加补料方式和发酵条件的控制,

进行高密度培养,并通过IPTG诱导获得可溶性表达的目的产物.结果表明:目的蛋白

占菌体总蛋白的30.0%以上;经阳离子交换层析、肝素亲和层析两步柱层析方法获

得的rhKGF-2纯度高于99.0%.建立了利用转受体FGFR2-Ⅲb的BaF3细胞株进

行rhKGF-2促增殖作用的活性测定方法,活性测定结果呈典型的S型曲线,并在一定

范围内具有剂量依赖性.%WeextractedtotalRNAfromhumanembryonic

lungfibroblastcellsandobtainedcDNAbymeansofRT-PCR.Thenthe

PCRproductswereinsertedintopET3cthatwastransformedintoBL21

(DE3)hostcells,whichwasinducedtodevelopsolubilityproteinproducts.

High-densityculturewasconductedinfed-batchmodeunderthecontrol

offermentationconditions.Purificationwascarriedoutbycationexchange

chromatographyandheparinaffinitychromatography.Andtheeffectof

rhKGF-2onproliferativeactivitywastestedviatransferringreceptor

FGFR2-MboftheBaF3cells.Weconstructedgeneengineeringbacteriaof

recombinanthumankeratinocytegrowthfactor-2(rhKGF-2),studiedthe

high-densitycultureofrecombinantengineeringbacteriaandpurification

processandestablishedthemethodofactivitydetermination.

Totalproteinismorethan30.0%ofthetotalbacterialproteinover

consecutivethreebatchesoffermentation.ThepurityofrhKGF-2was

higherthan99.0%aftertwo-stepcolumnchromatography.Webuiltanew

waytotestitsbiologicalactivity.Theresultshowsthatitseemedobviously

curvedletterS,whichhadsomerelationwiththedoseinsomeextent.

【期刊名称】《吉林大学学报（理学版）》

【年(卷),期】2011(049)006

【总页数】7页(P1150-1156)

【关键词】重组角质细胞生长因子-2(rhKGF-2);高密度培养;柱层析;转受体

FGFR2-Ⅲb;BaF3细胞株;生物活性

【作者】田海山;唐禄;王晓杰;王艳芳;官丽莉;李校堃

【作者单位】吉林农业大学,生物反应器与药物开发教育部工程研究中心,长

春,130118;温州医学院,药学院,浙江,温州,325035;温州医学院,药学院,浙江,温

州,325035;温州医学院,药学院,浙江,温州,325035;吉林农业大学,生物反应器与药物

开发教育部工程研究中心,长春,130118;吉林农业大学,生物反应器与药物开发教育

部工程研究中心,长春,130118;吉林农业大学,生物反应器与药物开发教育部工程研

究中心,长春,130118