大白鼠肝性脑病模型 .pdfVIP

郑州大学基础医学院

2009级天才七年八精英团队鼎力之作

指导老师:李沛教授,

张桂红教授

小鼠肝性脑病模型的制作与观察

【实验目的】

1复制小鼠肝性脑病动物模型，观察肝脏对氨的代谢作用和氨中毒对动物

的影响。

2认识肝脏对血氨清除的重要性，讨论肝脏对氨的代谢功能，氨在肝性脑

病发病中的作用机制。

【实验原理】

1、肝性脑病

定义：由于急性或慢性肝功能严重障碍是大量毒性代谢产物在体内聚集经血循

环入脑引起的中枢神经功能障碍(排除其他抑制脑病的神经心理异常综合征)，临

床上出现以意识障碍为主的一系列神经精神症状,最终出现昏迷。

发病基础：肝脏本身疾病

促发条件：加剧代谢紊乱，导致有毒产物增加的外界因素

2、

利用四氯化碳的毒性作用造成急性肝功能不全模型；在推注氯化铵使动物血

氨升高造成氨中毒，引发肝性脑病，出现震颤、昏迷躁动、抽搐、呼吸异常、四

肢僵直、重至死亡等类似肝性脑病症状，用波氏显色法检查小鼠体内氨的浓度。

证明氨在肝性脑病发病中的作用。

3、血液离体后,立刻加入定量过量的钨酸钠及硫酸溶液，使蛋白沉淀的同时,血液

中的氨与硫酸形成硫酸铵而存留在血液滤液中,再以酚-次氯酸钠显色后于波长

630nm处测定吸光度A值(以空白矫正)。

【实验动物】

3只各种生理体征相近且健康的小鼠,

【器材与药品】

1、实验器械：小鼠固定器，300ml广口瓶（带有橡皮塞），1ml注射器（配

针头）5套，电子称，10ml试管，721分光光度计，离心机,水浴锅，比色管等。

2、实验药品：40%的四氯化碳溶液，80g/L氯化铵，生理盐水，无氨蒸馏水，

0.15mol/L钨酸溶液，显色剂Ⅰ（酚5g硝普钠25mg，以无氨蒸馏水稀释到500ml），

显色剂Ⅱ（氢氧化钠2.5g，磷酸氢二钠26.8g次氯酸钠溶液5ml，无氨蒸馏水稀

释到500ml），100μmol/L硫酸铵标准液（10mmol/L硫酸铵标准液，用无氨蒸馏

水100倍稀释）。

【实验步骤】

1、小鼠随机分成A、B、C组,称重并记录;

2.、A、B组小鼠经腹腔注射40%的四氯化碳溶液（1.0ml/10g），C组经腹

腔注射等量生理盐水;

3、20分钟后，A、C组小鼠同时缓慢腹腔推注80g/L氯化铵溶液

（0.5ml/10g）,B组注射等量生理盐水;

4、步骤3完成后,开始观察三组小鼠的呼吸、角膜反射、反正反射及痛

觉反射，观察持续15分钟，并记录现象；

5、分別取A、B、C小鼠的尾部静脉血于装有肝素的试管里，试管分别记

为a1、b1、c1。取10ml带离心管3支，分别加入0.15mol/L钨酸1ml,再加入4ml

静脉血于钨酸溶液里，混匀变成褐色时，2500r/min，离心5min取上清液，分别

于试管a2、b2、c2中。另取2支试管，各置0.15mol/L钨酸4ml，依次加1ml

无氨蒸馏水，1ml100μmol/L硫酸铵标准液;

6、另取试管2支试管，分别标号d2、e2，标明测定管（a2、b2、c2），标

准管(d2)和空白管(e2)，按下表操作：

加入物（ml）测定液（U）标准液(S)空白管(B)

无蛋白上清液2.0--

标准混合液-2.0-

空白混合液--2.0

显色剂Ⅰ2.52.52.5

显色剂Ⅱ2.52.5