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重组表达乙肝病毒x蛋白的腺病毒构建及在HepG2细胞的
表达
张红飞;李军锋;户义;张慧娜;鲍春旸;王凯娟;周育森
【摘要】Aim;ToconstructrecombinantHBx-expressedadenovirus,and
establishacellculturemodelwithhigh-levelHBxexpressionbyinfection.
Methods:HBxgenewasclonedintotheshuttlevectorpAdTrack.After
confirmedbyrestrictiondigestion,theresultantplasmidwaslinearizedby
digestionwithPmeIandwassubsequentlytransformedintocompetent
E.collcellsBJ5183forhomologousrecombination.Therecombination
vectorpAd-HBxwaslinearizedwithPacIandtransfectedintoQBI-293A
cells.Thepackingofadenoviruswasdeterminedbytheexpressionof
EGFP.TheexpressionofHBxgeneinrecombinantadenoviruswas
identifiedbyRT-PCR.Viraltiterandinfectionefficiencyofadenovirus
weredetectedaccordingtotheexpressionofGFP.HepG2cellswere
infectedbyrecombinantadenovirus.Forty-eighthourslater,cellswere
collectedandlysedtodetecttheexpressionofHBxproteinbyWestern
blot.Results:Restrictiondigestionshowedthattherecombinant
adenovirusvectorpAd-HBxwassuccessfullyconstructed.AfterpAd-HBx
transfectedintoQBI-293Acells,fluorescencedetectionindicatedthatthe
adenoviruswassuccessfullypacked.TheexpressionofHBxgenewas
detectedbyRT-PCR.AfterinfectiontothehepatomaHepG2cells,the
expressionofHBxproteinwasdetectedbyWesternblot.Conclusion:The
recombinantadenovirusexpressingHBxgenehasbeensuccessfully
constructed.AfterinfectingHepG2cell,theHBxproteinexpressionis
detected,suggestingcellculturemodelwithhigh-levelexpressionofHBx
isestablished.%目的:构建重组表达HBx的腺病毒,并通过感染细胞建立HBx高表
达的细胞模型.方法:首先将HBx基因插入腺病毒穿梭质粒pAdTrack中,限制性酶
切鉴定正确后将其用PmeⅠ酶切线性化,转到BJ5183感受态细菌进行同源重组,重
组后的腺病毒载体pAd-HBx经PacⅠ酶切线性化后,转染到QBI-293A细胞中,根
据EGFP的表达判断重组腺病毒的包装情况.RT-PCR鉴定重组腺病毒的HBx
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