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2．发酵方式（1）分批发酵：在一封闭培养系统内含有初始限制量的基质的培养方法。延迟期、对数生长期、稳定期和衰亡期。（2）补料分批发酵：分批培养过程中，连续地或间歇地补加培养基（或某营养），而不从发酵罐中，间断地放出培养液。（3）连续发酵：培养基料液连续输入发酵罐，并同时放出含有产品的发酵液的过程。3．发酵过程的重要影响参数与控制（1）温度控制：最适生长温度，最适发酵温度。 加热、冷却。（2）pH控制：pH影响微生物生长和酶活性。 缓冲体系、直接补加酸或碱。（3）溶氧控制：溶氧影响菌体生长和产物合成。 临界氧浓度和最适氧浓度。通气、搅拌。（4）泡沫控制：培养基中蛋白类表活剂存在，通气搅拌易形成泡沫，影响菌体呼吸、生长代谢，泡沫逃逸还会增加染菌机会。 机械消泡，添加消泡剂（豆油、聚醚消泡剂等）。1、基因工程制药技术基础基因工程药物制造过程的主要程序是：获得目的基因→构建DNA重组体→将重组体导入宿主细胞→鉴定筛选阳性克隆→构建基因工程细胞→培养工程细胞→分离纯化表达产物→除菌过滤→半成品检定制剂→成品检定→包装第三节生物技术药物制造技术基础
?一、重组DNA技术原理2．基因工程操作过程：
（1）获得目的基因；（2）构建DNA重组体；（3）将重组体导入宿主细胞；（4）筛选阳性克隆与鉴定；（5）基因工程菌中，目的基因扩增与蛋白表达。
二、基因工程主要操作技术1．目的基因的获得基因组文库中获得cDNA文库中获得PCR扩增法化学合成方法中获得（1）cDNA文库
纯化目的mRNA，逆转录成cDNA①mRNA的分离②cDNA第一链的合成③cDNA第二链的合成④cDNA与载体连接⑤转染或转化⑥筛选目的克隆目的基因的获得：cDNA文库（2）PCR法或逆转录PCR（RT-PCR）
典型PCR反应包括:①模板变性94℃以上（1～2′）②退火50～55℃（10~30s）③延伸72℃（1kb/min）在高温聚合酶作用下，以DNA单链为模板，由引物起始从5′→3′延伸。No.of No.AmpliconCycles CopiesofTarget1 22 43 84 165 326 6420 1,048,57630 1,073,741,8241cycle=2Amplicon2cycle=4Amplicon3cycle=8Amplicon4cycle=16Amplicon5cycle=32Amplicon6cycle=64Amplicon7cycle=128Amplicon30次循环后靶序列扩增的数量（3）化学合成法在已知DNA序列或多肽的一般结构时，如链长在60bp～100bp可用化学合成法直接合成DNA。2．DNA重组体的构建根据宿主菌不同，选择基因载体（Vector）（1）E.coli：质粒非表达型pBR322，表达型pUC，实用型pBV220，PET系统，λ噬菌体DNA作为载体，非表达型λgt10，表达型λgt11。（2）芽孢杆菌：pUB110pE194和pC194（3）链霉菌：pIJ101pSG5目的基因与载体连接方法①黏端连接法②平端连接法③TA克隆头部尾尾部纤维蛋白衣壳λ噬菌体3.将重组DNA分子导入宿主细胞采用特定的方法将重组DNA分子转移至适当受体细胞并与之同步增殖（1）DNA重组体导入微生物细胞的方法转化作用：微生物细胞直接吸收外源DNA的过程转导作用：通过温和噬菌体颗粒的释放和感染将重组DNA转移至宿主内（2）DNA重组体导入动植物细胞的方法物理方法：显微注射、基因枪、电穿孔化学方法：磷酸钙共沉淀法、脂质体法生物学方法：反转录病毒法、原生体融合法4.鉴定带有目的基因的克隆从大量细胞繁殖群体中筛选出克隆有重组DNA分子的寄主细胞根据遗传表型差异进行筛选根据重组子的结构特征进行筛选抗性筛选菌落形态……
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