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HSPA13在ARPE19细胞氧化应激中的作用

李梦雯;吕亚莉;徐国彤;吕立夏

【期刊名称】《《同济大学学报（医学版）》》

【年(卷),期】2019(040)005

【总页数】9页(P554-562)

【关键词】过氧化氢;氧化应激;应激伴侣蛋白;视网膜色素上皮细胞;年龄相关性

黄斑变性

【作者】李梦雯;吕亚莉;徐国彤;吕立夏

【作者单位】同济大学医学院再生医学系生物化学与分子生物学教研室上海

200092;同济大学附属第十人民医院眼科上海200072

【正文语种】中文

【中图分类】R774.5

年龄相关性黄斑变性(age-relatedmaculardegeneration,AMD)，也称老年性

黄斑变性，是全世界老年人失明的主要原因之一[1]。视网膜色素上皮(retinal

pigmentepithelial,RPE)细胞的氧化损伤和慢性炎症被认为是AMD的发展过程

中重要的影响因素[2-3]。应激分子伴侣也称为HSPA13，是热休克蛋白家族的一

员，由钙离子诱导[4]。活性氧类(reactiveoxygenspecies,ROS)导致细胞内钙离

子超载，引发细胞凋亡[5-6]。

细胞内钙离子水平升高诱导HSPA13基因的表达上升，因此，本研究探讨

HSPA13在氧化应激诱导的人视网膜上皮ARPE19细胞中的表达情况，以及

HSPA13的表达水平对氧化应激诱导的ARPE19细胞中相关氧化应激指标和促炎

因子的影响；并在干扰HSPA13表达后进行RNA测序，对差异表达的基因进行

基因本体(geneontology,GO)分析及京都基因和基因组数据库(Kyoto

EncyclopediaofGenesandGenomes,KEGG)信号通路分析，为进一步探索

HSPA13在AMD中的作用机制提供依据。

1材料与方法

1.1材料及试剂

DME/F12培养基购自美国HyClone公司；胎牛血清购自美国Gibco公司；链霉

素及青霉素、CCK8试剂盒、丙二醛(malondialdehyd，MDA)试剂盒、还原型谷

胱甘肽(glutathione，GSH)检测试剂盒购自碧云天公司；3%H2O2购自美国

Sigma公司；anti-HSPA13、anti-β-actin、二抗购自Proteintech公司；TNF-α、

IL-8、IL-2和IL-1βELISA试剂盒购自美国BD公司。

1.2实验方法

1.2.1细胞培养使用DME/F12基础培养基，添加10%的胎牛血清和500μL的青

霉素链霉素双抗，在37℃、5%CO2的恒温培养箱中培养人ARPE19细胞。

1.2.2CCK8法测定细胞活力的改变实验前使用细胞培养基配制H2O2处理液，以

2×104/mL的密度将ARPE19细胞接种在96孔板中，细胞贴壁后，分别添加含

终浓度为10、25、50、100、200、300、400μmol/LH2O2的细胞培养基处理

细胞，处理4h。将体积分数为10%的CCK8工作液加入H2O2空白对照组(不含

H2O2的细胞培养组)、各浓度H2O2处理组和只含培养基的无细胞对照组中，将

细胞培养板置于37℃恒温培养箱30min。随后在450nm波长处检测各孔的光密

度值(D450)。每组设6个复孔，实验重复3次。

1.2.3实时荧光定量PCR待200μmol/LH2O2处理4h，TRIzol裂解液收集总

RNA，抽提RNA，反转录成cDNA，实时荧光定量PCR(quantitativereverse

transcription-polymerasechainreaction,qRT-PCR)检测HSPA13和抗氧化酶

[超氧化物歧化酶1(superoxidedismutase1,SOD1)、谷