癫痫动物模型的制备.ppt

关于癫痫动物模型的制备概述癫痫流行病学介绍1癫痫模型制备原理2不同的癫痫模型制备方法3讨论与展望4第2页,共21页，星期六，2024年，5月1.癫痫流行病学介绍癫痫是一种脑部疾患，特点是存在能产生癫痫发作的脑部持久性改变，并出现相应神经生物学、认知、心理学以及社会学等方面的后果。中国癫痫患病率约为7‰，每年新发病40万例，患者总数超过900万，其中超过一半是儿童及青少年。第3页,共21页，星期六，2024年，5月2.癫痫模型制备原理利用药物制备癫痫模型，通过破环脑部神经递质释放的平衡，阻断兴奋性氨基酸的循环通路，从而诱发癫痫形成与发作。利用手术制备癫痫模型，主要用于模拟外伤后癫痫。具体的发病机制尚不十分明确，目前研究显示与各神经元细胞之间的突触连接的改变有关。第4页,共21页，星期六，2024年，5月3.不同的癫痫模型制备方法癫痫动物模型1.药物建模通过药物注射的方式建立癫痫动物模型。2.手术建模利用外科手术的方法建立癫痫动物模型第5页,共21页，星期六，2024年，5月3.1药物建模的几种方法1注射合成红藻氨酸制备大鼠癫痫模型2注射氯化锂-匹罗卡品致大鼠癫痫模型3穿刺注射海人酸杏仁核点燃大鼠癫痫模型第6页,共21页，星期六，2024年，5月3.1.1注射合成红藻氨酸法红藻氨酸(kainicacid,KA)是红海藻的提取物，可作用于脊椎动物中枢神经系统的谷氨酸受体,可直接兴奋神经元,又可增强钠离子的通透性而使神经细胞去极化,诱发癫痫的发生。利用KA的人工合成品,即合成红藻氨酸(syntheticalkainicacid,SKA)制作大鼠癫痫模型。第7页,共21页，星期六，2024年，5月正常Wistar大鼠腹腔注射10mg/kgSKA后约5min,大鼠出现凝视行为(Ⅰ级),之分别在约23min、97min、129min和140min动物顺序出现Ⅱ-Ⅴ级癫痫发作。3h后症状减轻，7-8小时后停止，14小时基本恢复正常。制备过程第8页,共21页，星期六，2024年，5月方法特点注射合成红藻氨酸诱发大鼠癫痫，SKA5-12mg/kg腹腔注射可诱发大鼠癫痫发作,以10mg/kg剂量为佳。合成红藻氨酸诱发大鼠癫痫发作的阶段性明显、行为学表现规律、稳定,死亡率低，适宜大规模建立癫痫动物模型。第9页,共21页，星期六，2024年，5月3.1.2注射氯化锂-匹罗卡品法注射氯化锂（Licl）和匹罗卡品(pilocarpine,PI-LO)致癫痫模型在动物行为、脑电图、病理及药理特性上与人类颞叶癫非常类似。近年来一直被认为是研究颞叶癫痫的理想模型。第10页,共21页，星期六，2024年，5月制备过程正常Wistar大鼠经过腹腔注射LiCl125mg/kg,18-24h后腹腔注射PILO20mg/kg达到Ⅲ-Ⅴ级发作则为进入癫持续状态(statusepilepticus,SE),致成功。若无发作或发作未达到Ⅲ-Ⅴ级,则每隔30min腹腔注射PILO10mg/（kg·次),最多6次,其间癫痫发作Ⅲ级的大鼠认为致成功。第11页,共21页，星期六，2024年，5月方法特点PILO首次剂量为20mg/kg,以后小剂量给予PILO(10mg/kg),简单易用，可按个体差异控制PILO的用量，成功率较高。此方法的致癫痫率和自发发作的出现率基本一致,明显优于传统方法。是研究颞叶癫痫的理想模型。第12页,共21页，星期六，2024年，5月3.1.3穿刺注射海人酸法点燃模型(Kindlingmodel)是通过重复给予一个首发阈下电或化学刺激引起部分或全面性癫痫发作的癫痫模型,具备慢性、自发性和复发性特征。海人酸(kainicacid,KA)具有很强的神经毒性作用,海马富含KA受体,KA脑内注射能使动物产生长时间肢体型癫痫发作。第13页,共21页，星期六，2024年，5月制备过程Wistar大鼠麻醉后30min用5μL微量注射器吸KA1μL,颅骨穿刺以右侧杏仁基底核为KA注射部位，速度为1μL/min,留针5min，以确保药物被完全吸收。实验大鼠在KA杏仁核注射后平均41和61min分别依次出现部分性发作和癫痫性大发作第14页,共21页，星期六，2024年，5月方法特点用KA杏仁核微量注射,为全身给药点燃用量的万分之一,点燃成功率高达90%。点燃一旦建立,动物的这种脑细胞及惊厥行为敏感性可长期维