胃癌多药耐药细胞端粒酶活性变化及其机制探讨 .pdfVIP

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２００７年第３４卷第２２期胃癌多药耐药细胞端粒酶活性变化及其机制探讨．１２７１．

ｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎＳＧＣ７９０１／ＶＣＲｗａｓｃｏｒｒｅｌａｔｅｄｗｉｔｈｄｒｕｇ—ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ．Ｍａｄｌａｎｄｃ－Ｍｙｃｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｍａｙｃｏｎ—

ｔｒｉｂｕｔｅｔｏｈＴＥＲＴｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｎｄｔｅｌｏｍｅｒａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙ．

ＫｅｙｗｏｒｄｓＧａｓｔｒｉｃｃａｒｃｉｎｏｍａＴｅｌｏｍｅｒａｓｅＭｕｈｉ－ｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ

胃癌是常见的消化道恶性肿瘤，化疗是其主要生物公司；ＶＣＲ（长春新碱）购自上海华联医药厂。

的治疗手段，特别是对于手术后残留癌细胞的清Ｔｒｉｚｏｌ、Ｏｌｉｇｏｄ（Ｔ）１８、ＴａｑＤＮＡ多聚酶、ｒＲＮａｓｉｎ（Ｒ）

除、防止复发具有重要治疗价值。但由于肿瘤细胞ＲｉｂｏｎｕｃｌｅａｓｅＩｎｈｉｂｉｔｏｒ购自上海增健公司人３１一ａｃｔｉｎ

对化疗药物产生了多药耐药性（ｍｕｌｔ—ｄｒｉｕｇｒｅｓｉｓ—引物购自上海申能博彩公司。Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎ２０００转

ｔａｎｃｅ，ＭＤＲ），常常导致胃癌化疗效果不佳…。ＭＤＲ染试剂购自Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司。ＣＨＡＰＳ裂解缓冲液组

的发生机制十分复杂，现有的多药耐药机制尚不能成：Ｏ．５％ＣＨＡＰＳ，１０ｍｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ—ＨＣｌ（ｐＨ７．５），

完全阐明胃癌ＭＤＲ现象。因此，胃癌ＭＤＲ机制的ｌｍｍｏｌ／ＬＭｇＣ１２，１ｍｍｏｌ／ＬＥＧＴＡ，１０％甘油，５ｍｍｏｌ／

研究对寻找新的克服胃癌ＭＤＲ的方法，改善胃癌Ｌ１３一巯基乙醇（临时力Ⅱ），０．１ｍｍｏｌ／ＬＰＭＳＦ（临时

患者的预后意义重大。加）。ＴＲＡＰ反应缓冲液组成：２０ｍｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ—ＨＣ１

端粒酶是一种逆转录核糖核蛋白酶，由人端粒（ｐＨ８．３），１．５ｍｍｏｌ／ＬＭｇＣ１２，６３ｍｍｏｌ／ＬＫＣ１，０．００５％

酶逆转录酶（ｈＴＥＲＴ）、人端粒酶ＲＮＡ组分（ｈＴＲ）以Ｔｗｅｅｎ一２０，ｌｍｍｏｌ／ＬＥＧＴＡ，０．１ｍｇ／ｍｌＢＳＡ。

及人端粒酶相关蛋白ｌ（ｈＴＥＰ１）组成，其中ｈＴＥＲＴ１．２方法

是其限速因子。端粒酶的激活可延长和保护端粒重１．２．ＴＲ１ＡＰ银染法检测端粒酶活性收集细胞加

复序列，维持染色体稳定，并促使细胞增殖和永生１００１￣Ｃ１ＨＡＰＳ裂解缓冲液，冰浴３０ｍｉｎ１２Ｏ００ｒｐｍ

化ｌ２］。端粒酶的激活也是肿瘤形成的重要机制之一。４ｃｃ离心２０ｍｉｎ，收取上清（Ｓ—ｌ０ｏ提取液）用Ｂｒａｄ—

近年多项研究显示，端粒酶的激活能降低肿瘤的化ｆ０ｒｄ法进行蛋白定量，立即检测或一８Ｏｃｃ保存。取

疗敏感性ｌ３＿，并且ｈＴＥＲＴ的表达水平可影响肿瘤的ｌｐｇＳ一１００提取液至５０ｘＴＲＡＰ反应缓冲液中，另加

化疗效果．由此提示端粒酶活性与肿瘤ＭＤＲ之间ｌＯｍｍｏｌ／ＬｄＮＴＰｌｌ，ＴＳ引物０、ｌｇ，Ｔ４ｇ３２蛋白

存在一定联系ｌ４］。新近研究显示端粒酶还具有端粒ｇ，ｌＴａｑＤＮＡ多聚酶２Ｕ，室温孵育３０ｍｉｎ。随后加

外功能，如抗细胞凋亡作用ｌ５＿，而现已明确抗细胞凋ＣＸ引物Ｏ．１ｇ进行ＰＣＲ扩增。ＰＣＲ扩增条件：９Ｏｃｃ

亡是ＭＤＲ发生机制之一．因此．端粒酶与ＭＤＲ之变性２ｍｉｎ，９４ｃｃ３０ｓ、５０ｃｃ３０ｓ、７２ｃｃ４５ｓ．扩增３５个

间的关系有待深入研究。本文对人胃腺癌细胞系循环。ＰＣＲ扩增完毕后行ｌ２％聚丙烯酰胺凝胶电泳

ＳＧＣ７９０１及其多药耐药亚系ＳＧＣ７９Ｏｌ／ＶＣＲ中