美白实验(鱼胚实验)实验方法.docxVIP

  1. 1、本文档共12页,可阅读全部内容。
  2. 2、有哪些信誉好的足球投注网站(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
  3. 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载
  4. 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
  5. 5、该文档为VIP文档,如果想要下载,成为VIP会员后,下载免费。
  6. 6、成为VIP后,下载本文档将扣除1次下载权益。下载后,不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们
  7. 7、成为VIP后,您将拥有八大权益,权益包括:VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
  8. 8、VIP文档为合作方或网友上传,每下载1次, 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等,对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多

化妆品美白实验(鱼胚实验)实验方法

1.范围

本标准规定了化妆品美白功效的斑马鱼鱼胚实验的实验原理、实验准备、

实验方法和实验结果。

第一法为显微观察法,适用于液态水基类、膏霜乳液、凝胶类、可溶性粉

剂化妆品原料及其产品的美白功效定性观察。

第二法为黑色素生成抑制检测,适用于液态水基类、膏霜乳液、凝胶类、

可溶性粉剂化妆品原料及其产品美白功效定量检测。

第三法为酪氨酸酶活性抑制检测,适用于液态水基类、膏霜乳液、凝胶类、

可溶性粉剂化妆品原料及其产品美白功效定量检测。

2.定义

hourspost-fertilization(hpf):受精后小时数

3.规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注明日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件,凡不注明日期的引用文件,其必威体育精装版版本(包括所

有的修改单)适用于本文件。

化妆品安全技术规范2020版

GB/T6678化工产品采样总则

GB/T6679固体化工产品采样通则

第一法显微观察法

4.检测原理

受试样品配置成溶液孵育鱼胚72h后,于体式显微镜下观察,可根据黑色

素在鱼胚体表的沉积,观察到黑色素含量的变化。

5.实验材料与试剂

5.1.材料

5.1.1.斑马鱼交配盒

5.1.2.鱼胚收集器

5.1.3.细胞培养板:6孔细胞培养板

5.2.试剂

5.2.1.二甲基亚砜

5.2.2.二甲基亚砜标准储备液(1%):量取二甲基亚砜标准品1.0mL(精确至

0.1ml),用斑马鱼系统养殖水稀释并定容至100mL容量瓶,于28℃保存。

5.3.对照品

5.3.1.熊果苷标准品,纯度≥98%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物。

5.3.2.熊果苷标准储备溶液(1mg/mL):称取熊果苷标准品10mg(精确至

0.01mg),用斑马鱼系统养殖水溶解并定容至10mL容量瓶,于28℃保存。

6.实验仪器与设备

6.1.斑马鱼养殖系统

6.2.连续变倍体式显微镜(带拍照功能)

6.3.恒温培养箱

6.4.天平:精密度0.00001g

6.5.软件:SPSS统计分析软件、Origin函数绘图软件

7.实验步骤

7.1.实验准备

7.1.1.鱼胚品系:野生型AB系斑马鱼自然交配的胚胎;

7.1.2.鱼胚要求:以斑马鱼开始交配受精为0hpf,选用8~10hpf健康、无畸

形、正常发育的鱼胚用于实验;

鱼胚死亡的表现形式:胚胎的凝固,体节形成缺失,尾未分化和心跳缺失,

任何这些观察结果中的一个阳性结果都意味着胚胎的死亡。

鱼胚畸形的表现形式:脊柱弯曲,心胞水肿,尾部弯曲,血管堵塞等。

7.1.3.鱼胚孵育温度:28±1℃;

7.2.样品提取

7.2.1.水溶性样品:使用斑马鱼系统养殖水将受试样品稀释成0.01、0.1、1、

10、100mg/mL实验浓度,混匀,于4℃保存备用。

7.2.2.非水溶性样品:使用二甲基亚砜标准储备液(1%)将受试样品稀释成

0.01、0.1、1、10、100mg/mL实验浓度,混匀,于4℃保存备用。

7.3.对照组溶液

7.3.1.空白对照组溶液:斑马鱼系统养殖水

7.3.2.溶剂对照组溶液:二甲基亚砜标准储备液(1%)

7.3.3.阳性对照组溶液:熊果苷标准储备溶液(1mg/mL)

7.4.实验方法

随机挑选8~9hpf健康、无畸形、正常发育的鱼胚用于实验。使用6孔细胞培养板为实验载体,每组设置3个平行组,每孔加入鱼胚20枚,受试样品组加入受试样品溶液5mL,空白对照组加入斑马鱼系统养殖水5mL,溶剂对照组加入二甲基亚砜溶液(1%)5mL,阳性对照组加入熊果苷标准储备溶液

(1mg/mL)5mL,置于恒温培养箱28℃孵育。

8.实验结果

于24、48和72h时在体式显微镜下观察,并拍照记录。其中,每组实验取3尾鱼胚用于拍照,拍照时固定拍照参数,将鱼胚平躺固定,聚焦鱼胚卵黄囊部位进行拍照,拍照时固定拍照参数,将鱼胚平躺固定,聚焦鱼胚卵黄囊部位

进行拍照,观察各组斑马鱼体表黑色素的分布面积和数量。

9.质量控制

9.1.1.基本原则:测试中设置的对照检测应符合以下情况,如出现非下述标准,

则视为质控不合格。

9.1.2.根据观察结果,与空白组和阳性对照组相比,可明显观察到体表黑色素

的分布面积和数量减少,说明受试样品有效。

第二法黑色素生成抑制检测法

10.检测原理

受试样品配置成溶液孵育鱼胚72h后,通过对鱼胚破碎、离心,

文档评论(0)

法律咨询 + 关注
实名认证
服务提供商

法律职业资格证、中级金融资格证持证人

法律咨询服务,专业法律知识解答和服务。

版权声明书
用户编号:8027066055000030
领域认证该用户于2023年04月14日上传了法律职业资格证、中级金融资格证

1亿VIP精品文档

相关文档