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盐穗木金属硫蛋白的原核表达及功能活性分析

胡真真;孟红恩;刘忠渊

【摘要】为了探究盐穗木金属硫蛋白(HcMT)对金属离子的结合能力和转基因工程

菌对非生物协迫的耐受性,将HcMT基因亚克隆至原核表达载体pET-32a上.诱导

表达后,用5-Br-PAPS方法测定融合蛋白TrxA-HcMT与Zn2+离子的结合能力,并

用原子吸收分光光度法测定其与多种金属离子的结合能力,用含有非生物协迫因素

的培养基培养转基因工程菌,探究其对非生物协迫的耐受性.结果显示在诱导过程中

添加Zn2+,融合蛋白TrxA-HcMT反应体系中吸光值与对照TrxA相比显著增

高.TrxA-HcMT能够结合多种金属离子,其中对Cu2+的结合能力最强,是对照的

20.3倍,对Cd2+的结合能力次之,是对照的5.6倍.在H2O2、NaHCO3、

Na2CO3非生物协迫的条件下,转HcMT基因工程菌比对照组菌的耐受性更

好.%Toinvestigatethemetal-bindingabilityandtoleranceoftransformed

bacteriatoabioticstressofHalostachyscaspicametallothionein,theHcMT

genewassubclonedintoprokaryoticexpressionvectorpET-32a.After

inducingexpression,thebindingcapacityofthefusionproteinTrxA-HcMT

andZn2+weredeterminedby5-Br-PAPSmethod,andthebinding

capacityofthefusionproteinwithvariousmetalionswasdeterminedby

atomicabsorptionspectrophotometry.Thetransformedbacteriawere

culturedwithculturemediumcontainingabioticstressfactorstostudyits

tolerancetoabioticstress.Theresultsshowedthattheabsorbancevalueof

thefusionproteinTrxA-HcMTreactionsystemwassignificantlyhigher

thanthatofthecontrolTrxAwiththeadditionofZn2+intheinduction

process.TrxA-HcMTcancombineavarietyofmetalions,whichisthe

strongestbindingcapacityofCu2+,is20.3timesofthecontrol,the

combinationoftheabilityofCd2+is5.6timesofthecontrol.Underthe

abioticstressofH2O2,NaHCO3andNa2CO3,theHcMTgenetransformed

bacteriawasbettertoleratedthanthecontrolbacteria.

【期刊名称】《新疆大学学报（自然科学版）》

【年(卷),期】2017(034)004

【总页数】6页(P467-472)

【关键词】盐穗木金属硫蛋白;金属结合能力;原子吸收分光光度法;非生物胁迫

【作者】胡真真;孟红恩;刘忠渊

【作者单位】新疆大学生命科学与技术学院,新疆生物资源基因工程重点实验室,新

疆乌鲁木齐830046;新疆大学生命科学与技术学院,新疆生物资源基因工程重点实

验室,新疆乌鲁木齐830046;新疆大学生命科学与技术学院,新疆生物资源基因工程

重点实验室,新疆乌鲁木齐830046

【正文语种】中文

【中图分类】Q74

金属硫蛋白（Metallothioneins，MTs）是一类富含半胱氨酸残基（25%∼33%）

的小分