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浙江临床医学２００８年６月第ｌ０卷第６期－７４９・
组织蛋白酶Ｂ及其抑制剂ＣＹＳＴＡＴＩＮＣ与大肠腺瘤
及大肠腺癌关系的实验研究
乔镇关景明汪丽燕
大肠腺瘤是大肠癌的癌前病变，是大肠癌主要致病因用凝胶成像系统进行观察，照相，并运用凝胶分析软件，对
素之一。作者自２００３年１０月至２００４年４月研究组织蛋白ＰＣＲ产物进行半定量分析。
酶Ｂ（ｃａｔｈｅｐｓｉｎＢ）及其抑制剂ｃｙｓｔａｔｉｎＣ在大肠腺瘤及大肠腺１．３统计学分析采用ＳＰＳＳ１２．０软件，计量资料以（１／ｌｅａｎ
癌中的表达情况，探讨大肠癌发生、发展的分子生物学机±ＳＤ）表示，用单因素ＡＮＯＶＡ法，方差不齐用Ｇａｍｅｓ—Ｈｏｗｅｌｌ
制。检验进行多个样本均数间的多重比较。
１材料和方法２结果
１．１材料引物由上海捷倍思公司合成，合成的引物序用一步ＲＴ—ＰＣＲ半定量的方法，证实了所有大肠腺癌、
列…见表１；ＲＴ—ＰＣＲ盒购自Ｐｒｏｍｅｇａ公司；Ｔｒｉｚｏｌ裂解液购腺瘤、正常组织中都存在组织蛋白酶Ｂ和抑制剂ｃｙｓｔａｔｉｎＣ
自Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司；７例大肠癌组织和７例癌旁正常对照组织ｍＲＮＡ的表达，如图１及表２。
均取自手术中切除的组织，正常组织距离癌组织＞１０ｃｍ；１１表２组织蛋白酶Ｂ和ｃｙｓｔａｔｉｎＣ的ｍＲＮＡ在各组的表达（±ＳＤ）
例大肠腺瘤组织取自大肠镜下切除的息肉。以上新鲜组织
用生理盐水迅速清洗，去除表面血液及粪便，立即置入液氮
冷却，保存在一８０℃冰箱中。手术及内镜下标本均经哈尔
滨医科大学附属第二医院病理科病理医生诊断证实。
表１ＰＣＲ各引物序列及片段大小
１．２方法从一８０℃冰箱中取出标本，放入研钵中，加入少
量液氮，快速研磨成为粉末状，倒入装有ｌｍＴｌｒｉｚｏｌ裂解液的ＭＣＡＡＤＮＯＭＮＯＡＤＣＡＣＡＡＤＮＯ
Ｍ－．ｍｒ￣ｒ分子（量标记
１．５ｍｌ的Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ管中，混匀，室温下放置１０ｍｉｎ。每个试管＾Ｄ堋－Ｃ黼赶识）ＮＯ－ｔｍｒｍ．Ｉ正常【衄织）
中加入０．２ｍｌ氯仿，混匀，室温下放置２～３ｍｉｎ。在４℃低温图ＣａｉｔｈｅｇｓｌｎＢ和ＣｙｓｔａｔｉｎＣ在不同组织中ＰＣＲ表达的凝胶电泳图像
下，１２０００ｇ离心１５ｍｉｎ。离心后，取出试管，将含有ＲＮＡ的水３讨论
相约０．５ｍｌ转移到另一个试管中。再加入０．５ｍｌ的异丙醇，大肠癌的恶性行为主要表现为浸润和转移，此过程需
室温下放置１０ｍｉｎ。在４℃低温下，１２０００ｇ离心１０ｍｉｎ，在管要：肿瘤细胞与细胞外基质和基底膜成分的黏附、细胞对细
壁或底部可见无色胶状沉淀。吸去上清，加入ｌｍｌ的７５％胞外基质和基底膜的降解、以及细胞移行几个基础过程。
乙醇洗涤ＲＮＡ１次。在４℃低温下，以７５００ｇ离心１０ａｒｉｎ。组织蛋白酶Ｂ可以调节细胞凋亡，促进新生血管形成＿２Ｉ３Ｊ，
去掉乙醇，室温下晾干５～１０ｍｌｎ。将ＲＮＡ沉淀溶解于２０／ｚｌ调节其他蛋白酶的表达。在肿瘤组织中，组织蛋白酶Ｂ可
无菌高压的去离子水中，一７０℃冻存，备用。通过核酸蛋白以由肿瘤细胞和基质细胞分泌，降解蛋白聚糖，层粘连蛋
定量检测仪测定总ＲＮＡ的浓度并检测ＲＮＡ质量，用凝胶成白，纤维连接蛋白和Ⅳ型胶原蛋白等多种细胞外基质成
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