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细胞实验

实验七、Hela细胞凋亡诱导及检测

一、实验目的

学习细胞凋亡诱导及检测。

二、实验原理

1.细胞凋亡是多细胞有机体为调控机体发育，维护内环境稳定，由基因控制的细

胞主动死亡过程，是细胞衰老自然死亡的主要方式之一，是一种自然的生理学

过程。与细胞坏死不同，不会引起炎症反应，不释放细胞内容物。

2.DAPI是一种荧光染料，它可以与DNA双螺旋的凹槽部分发生相互作用，从而与

DNA紧密结合，可在紫外下激发蓝光。

三、实验材料

8.8mol/L的HO溶液，甲醇，PBS溶液，10μg/mL的DAPI染液

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四、实验步骤

1.细胞传代（上一次实验完成）

2.凋亡诱导

1)取做H.E染色的小皿，加HO溶液150μL使终浓度为0.8mol/L

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2)24小时后收集细胞进行染色和形态学观察。

3.染色

1）收集细胞，观察，贴壁细胞较多，直接用PBS溶液洗

2）吸出洗液，加入500μL甲醇，室温固定10min

3）倒掉甲醇，PBS洗净，加500μLPBS溶液和50μLDAPI母液，于37℃染色10min

4）倒掉染液，用PBS洗净（注意避光），加入500μLPBS溶液，倒置荧光显微镜

下观察并拍照。

五、实验结果与分析

1.观察：

实验开始前镜检：

细胞贴壁较多，细胞有的仍呈不规则状，有的细胞已皱缩，还有一些细胞

呈圆形浮在培养基中，核质分界不明显。可以看到有的细胞处于裂解状态。

染色后：

由于DAPI染料只对核进行染色，所以在紫外下只可见核的结构。

视野里最多的是正常细胞，其特点是染色质均一且核表面光滑，说明凋亡

是不同步的。

凋亡各时期的细胞也都可见，其主要特点是染色不均一。凋亡前期和中期

的细胞较多。很少看到凋亡末期的细胞，除了这个时期细胞较少外，还可能因

为在前期操作中很多凋亡小体被洗掉了。而且有的细胞在正常光下观察是明显

的裂解状态，但是到紫外光路下就变得很不明显了。

另外，可以看到很多分裂期的细胞，其特点为染色深，细胞核染色质浓缩，

但是看起来较均一，往往有对称性，特别是分裂末期的细胞两个子细胞会靠在

一起。

2.照片及分析：

细胞实验

controlStageⅠ

StageⅡaStageⅡb

图1Hela细胞凋亡过程中核染色质的形态学变化DAPI染色（图片来自我拍

的照片，用photoshop把不同凋亡时期的不同细胞放在了一张图里以便观

察。）

Control:对照组的细胞核形态正常，表面光滑，染色质均一。

StageⅠ：凋亡前期的细胞染色质凝集化，可以看到染色不均一，细胞核形态

发生变化，表面不再光滑，核轮廓不规则。

StageⅡa：凋亡中期细胞核固缩，染色体凝集化边缘化，细胞核仍然形状不规

则。

StageⅡb：凋亡后期核崩解，成为碎片，可以看到颗粒状的染色体碎片，它们

会形成凋亡小体。

六、讨论

1.细