SELDI技术对开放性脊柱裂胎鼠羊水蛋白质组学的初步分析 .pdfVIP

SELDI技术对开放性脊柱裂胎鼠羊水蛋白质组学的初步分析

刘振江;袁正伟;赵群

【摘要】目的利用表面增强激光解析/离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术

对脊柱裂胎鼠模型的羊水进行初步的蛋白质组学分析.方法将25只雌性Wistar大

鼠随机分为脊柱裂组(n=15)和对照组(n=10).于妊娠第10日(E10)8时,脊柱裂组孕

鼠经胃管注入全反式维甲酸与矿物油的混合物(140mg/kg);对照组孕鼠给予等量

的橄榄油.于妊娠第17日(E17)取胎鼠,立体显微镜下抽取羊水(0.2mL/只)并确定开

放性脊柱裂胎鼠.选取60只脊柱裂胎鼠和55只对照组胎鼠的羊水离心取上清.采用

PBSⅡC型蛋白质芯片阅读机读取数据.采用Ciphergenproteinchip3.1.1软件

对数据进行统计分析.SELDI数据结果采用分类与回归树分析建立诊断模型,用于区

分脊柱裂组胎鼠与对照组胎鼠.结果脊柱裂胎鼠羊水中共检测到55个差异蛋白峰,

有统计学意义的差异蛋白峰有9个.包括5种蛋白峰高表达,优化相对分子质量(m/z)

分别为11658,27387,7898,11603,13831Da;4种蛋白峰低表达,m/z分别为5

124,14702,5403,13626Da.选取m/z13831Da和m/z17798Da用于建立

决策分类树诊断模型,诊断灵敏度93.33％,特异度96.36％,阳性预测值96.55％,阴

性预测值96.36％.结论SELDI技术可初步筛选出脊柱裂胎鼠羊水中的差异蛋白峰,

这些蛋白可能是脊柱裂胎鼠羊水中的特异性羊水标志物.

【期刊名称】《中国医科大学学报》

【年(卷),期】2014(043)001

【总页数】6页(P26-30,33)

【关键词】神经管缺陷;脊柱裂;表面增强激光解析/离子化飞行时间质谱;羊水;蛋白

标志物

【作者】刘振江;袁正伟;赵群

【作者单位】中国医科大学附属盛京医院小儿外科,沈阳110004;中国医科大学附

属盛京医院卫生部小儿先天畸形重点实验室,沈阳110004;中国医科大学附属盛京

医院小儿外科,沈阳110004

【正文语种】中文

【中图分类】R714.53

先天性开放性脊柱裂是一种常见的先天畸形，也是先天性神经管缺陷（neural

tubedefects，NTDs）最重要的类型，其发病机制尚不明确。目前多认为是遗传

因素与环境因素相互作用的结果。严重的显性脊柱裂常伴有脊髓脊膜膨出，甚至脊

髓外翻，致死率和致残率很高。我国每年有8～10万NTDs患儿出生。因此，早

期发现NTDs具有重要意义。母亲血清甲胎蛋白（maternalserumalpha-

fetoprotein，MSAFP）和羊水甲胎蛋白（amnioticfluidalpha-fetoprotein，

AFAFP）是筛查脊柱裂等NTDs的传统标记物，但是检出率较低。约75%～80%

的开放性脊柱裂畸形的MSAFP水平升高［1～5］。而AFAFP的假阳性率为63%

［6］。在临床已经确诊的NTDs中仅有80%病例出现AFAFP水平增高［7］。

而羊水乙酰胆碱酯酶的敏感度在孕期也会降低，在具有其他诊断的病例和血液污染

的病例均会出现假阳性［8，9］。本研究采用维甲酸制作脊柱裂胎鼠模型，利用

表面增强激光解析/离子化飞行时间质谱（surfaceenhancedlaser

desorption/ionizationtime-of-flightmassspectrometry，SEDLI-TOF-MS）

技术寻找脊柱裂胎鼠羊水的蛋白质谱规律，以期发现对于脊柱裂早期诊断有效的标

记物。

1.1材料

1.1.1实验动物及分组：雌性Wistar大鼠（体质量250～280g）25只，购自中

国医科大学实验动物中心。分为脊柱裂组（n=15）和对照组（n=10）。饲养条

件：室温20～25℃，湿度60%～70%，昼夜12h循环。雌鼠和雄鼠交配后次日

8时阴道涂片，有阴道栓精子者确定妊娠第0日（E0）。在妊娠第10日（E10）

8时，脊柱裂组孕鼠经胃管注入全反式维甲酸与矿物油的混合物（140mg/kg）。

对照组孕鼠给予等量的橄榄油［10］。妊娠第17日（E17），给予10%水合氯