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SC/T7212.1-2011
目。
SC/T7212-2011分为三个部分:
第1部分:锦鲤痕掺病毒;
第2部分:鲤瘟疮病毒;
第3部分:金鱼造血器官坏死病毒。
本部分为SCIT7212-2011的第1部分。
本部分按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。
请注意本文件的某些部分可能涉及专利,本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。
本部分由中华人民共和国农业部渔业局提出。
本部分由全国水产标准化技术委员会(SAC/TC156)归口。
本部分起草单位:中国水产科学研究院珠江水产研究所、广东出入境检验检疫局、广州市兴达动物
药业有限公司。
本部分主要起草人:谭爱萍、叶星、姜兰、赵飞、邹为民、林志雄、陆小苔、乌日琴、简清、陈信廉。
SC/T7212.1-2011
鲤瘪殇病毒检测方法
第1部分:锦鲤痞殇病毒
1范围
本部分规定了锦鲤痕殇病毒(Koiherpevirus,KHV)的采样程序、病毒鉴定方法与结果判定指标。
本部分适用于锦鲤瘪殇病毒的检测。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文
件。凡是不注日期的引用文件,其必威体育精装版版本(包括所有的修改单〉适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
GB/T18088出人境动物检疫采样
SC/T7014-2006水生动物检疫实验技术规范
3术语和定义
下列术语和定义适用于本部分。
3.1
锦鲤癌药奋病毒Koihe叩evirus,KHV
锦鲤瘪麽病毒,又称鲤痞莎病毒3型CCyHV3),是一种双链DNA病毒,其直径为170nm~230
m,含有31个病毒多肤,其有核心、衣壳和囊膜结构。
4试剂和材料
4.1水
符合GB/T6682中一级水的要求。
4.2阳性对照
阳性对照为已知受KHV感染,且PCR检测结果为锦鲤范掺病毒阳性的DNA模版。
4.3阴性对照
阴性对照为已知未受KHV感染,且PCR检测结果为锦鲤瘪掺病毒阴性的DNA模版。
4.4空白对照
灭菌双蒸水(元DNA酶)。
4.5无水Z醇
4.6十六烧基三甲基漠化镀(CTAB}
4.7TaqDNA聚合酶
TaqDNA聚合酶或ExTaqDNA聚合酶,生化试剂,一20℃保存。
4.8dNlPs混合物
含dATP、dTTP、dCTP、dGTP各25mmol/L的混合物,一20℃保存。
4.9引物
锦鲤痕殇病毒胸背激酶CTK)基因扩增引物,Pl:5仁GGG-TTA-CCT-GTA-CGA-G-3IP2:
SC/T7212.1-2011
5-CAC-CCA-GTA-GAT-TAT-GC-3’。
锦鲤范步病毒Sph基因扩增引物,P3:5-GAC-ACC-ACA-TCT-GCA-AGG-AG-3',问:5
GAC-ACA-TGT-TAC-AAT-GGT-CGC-3'。
4.10矿物油
要求无DNA酶,用于无热盖的PCR扩增仪。
4.11DNA分子量标准
推荐使用DNAladder100,各片段大小依次为:1500坤,1000bp,900bp,800hp,700坤,600hp,
500忡,400bp,300坤,200坤,100hp。也可使用其他合适的DNA分子量标准。
4.12核酸凝胶染色剂
澳化乙咬(EB)或其他EB替代品。
5仪器与设备
5.1PCR扩增仪
5.2水平电泳仪
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