紫外可见分光光度法 (7).ppt

**测量导数光谱曲线的峰值方法有基线法、峰谷法及峰零法。****孤立助色团：饱和烃的取代衍生物；孤立生色团：孤立双键和羰基化合物等。**精细结构由振动跃迁在基态电子跃迁上的叠加而引起。**2，3二烷基－1，4萘醌****经单色器分光后分解为强度相等的两束光，一束通过参比池，一束通过样品池。光度计能自动比较两束光的强度，此比值即为试样的透射比，经对数变换将它转换成吸光度并作为波长的函数记录下来。**经单色器分光后分解为强度相等的两束光，一束通过参比池，一束通过样品池。光度计能自动比较两束光的强度，此比值即为试样的透射比，经对数变换将它转换成吸光度并作为波长的函数记录下来。4.检测器利用光电效应将透过吸收池的光信号变成可测的电信号，常用的有光电管、光电倍增管、光电二极管、光电摄像管等。要求灵敏度高、响应时间短、噪声水平低、稳定性好的优点。5.显示器将监测器输出的信号放大并显示出来的装置。常用的有液晶数字指示窗口和计算控制显示。第127页,共142页，5月，星期六，2024年，5月(一)按仪器使用波长分类：①真空紫外分光光度计（0.1-200nm）；②可见分光光度计（350-700nm）；③紫外-可见分光光度计（190-1100nm）；④紫外-可见-红外分光光度计（190-2500nm）。（二）按仪器使用的光学系统分类：①单光束分光光度计；②双光束分光光度计；③双波长分光光度计。二、分光光度计的类型第128页,共142页，5月，星期六，2024年，5月（１）单光束分光光度计经单色器分光后的一束平行光，轮流通过参比溶液和样品溶液，以进行吸光度的测定。样品池参比池优点：简单，价廉，适于在给定波长处测量吸光度或透光度。缺点：一般不能作全波段光谱扫描，要求光源和检测器具有很高的稳定性。第129页,共142页，5月，星期六，2024年，5月比值光源单色器吸收池检测器显示光束分裂器（2）单波长双光束分光光度计第130页,共142页，5月，星期六，2024年，5月优点：自动记录，快速全波段扫描。可消除光源不稳定、检测器灵敏度变化等因素的影响，特别适合于结构分析。缺点：仪器复杂，价格较高。第131页,共142页，5月，星期六，2024年，5月（３）双波长分光光度计由同一光源发出的光被分成两束，分别经过两个单色器，得到两束不同波长（?1和?2）的单色光；通过切光器以一定的频率交替通过同一样品池，然后由检测器交替接收信号，最后由显示器显示出两个波长处的吸光度差值ΔA。无需参比池。△A就是扣除了背景吸收的吸光度。光源检测器单色器单色器切光器吸收池双波长分光光度计示意图第132页,共142页，5月，星期六，2024年，5月对于多组分混合物、混浊试样（如生物组织液）分析，以及存在背景干扰或共存组分吸收干扰的情况下，利用双波长分光光度法，往往能提高方法的灵敏度和选择性。利用双波长分光光度计，能获得导数光谱。双波长BECKMAN-DU_640第133页,共142页，5月，星期六，2024年，5月（三）紫外-可见分光光度计主要技术指标1.波长范围：表示仪器能测定的波长范围。波长范围越大，仪器越好，这与仪器使用的灯有关。2.波长精度：表示仪器单色器波长误差程度。波长误差越小，仪器精度越高，这与仪器使用的单色器有关。3.杂散光：表示单色光的纯度。这与制作单色器的材料和加工工艺有关。第134页,共142页，5月，星期六，2024年，5月4.光度的测量精度：表示仪器每次测定显示读数的精确度，即仪器能准确读小数点后几位。位数越多，仪器精度越高，这与仪器使用的检测系统有关。5.光度测量的重现性：每次A读数的重现性。这与仪器使用的检测器的质量有关。6.分辨率：表示仪器分辨吸收光谱微细结构的能力，即指仪器对于紧密相邻的峰可分辨的最小波长间距。这是衡量仪器性能的一个综合指标。第135页,共142页，5月，星期六，2024年，5月（四）分光光度计的光学性能校正验收新仪器或当光度计使用一段时间后其波长和吸光度将出现漂移，因此需要对其进行校正。波长标度校正：使用镨-钕玻璃（可见光区）和钬玻璃（紫外光区）进行校正。因为二者均有其各自的特征吸收峰。吸光度标度校正：采用K2CrO4的硫酸溶液校正：在25oC时，准确称取基