猪流感病毒新型核糖体移码蛋白PA-X特有序列的原核表达、纯化及鉴定.pdfVIP

猪流感病毒新型核糖体移码蛋白PA-X特有序列的原核表达、

纯化及鉴定

宫晓倩;郑浩;童光志;于海;阮宝阳;刘晓敏;张鹏;汪琪;汪秀会;周艳君;李泽君;童武

【摘要】ThenovelinfluenzaAvirusproteinPA-Xisaribosomalframe-

shiftingproductthatmodulatesthehostresponseandviralvirulence.In

thepresentstudy,PA-Xproteinwasprokaryoticallyexpressed,purifiedand

characterizedinordertoinvestigateitsbiologicalfunctions.ThePA-X

codinggenewasamplifiedinRT-PCRandoverlappingPCR.The

prokaryoticexpressionvectorswereconstructedwiththegene

recombinationtechniqueandverifiedusingbacteriumsolutionPCRand

sequencing.ThepositiveclonesweretransformedintoE.coliBL21(DE3)

andtheexpressedproteinwasanalyzedforitssolubility.ThePA-X

productswerepurifiedusingnickelcolumnchromatography.The

sequencesoftheplasmidsandopenreadingframesweredemonstratedto

becompletelycorrect.Aftertransformation,theseplasmidsexpressedthe

expectedproteinswithsolublenature.Subsequently,thePA-Xproteinwas

purifiedandusedinWesternblottoreactwiththemouseantiserum

againsttheH1N1swineinfluenzavirus.Thepositivereactionbetweenthe

PA-Xproteinandmouseantiserumwasobserved.%核糖体移码蛋白PA-X是

流感病毒的一种新型蛋白，为了研究该蛋白对于猪流感病毒的生物学特性的影响，

我们进行了PA-X特有序列的原核表达、蛋白纯化及其鉴定。通过RT-PCR和重叠

PCR方法扩增PA-X特有序列的基因，利用基因重组技术构建原核表达载体，并

进行菌液PCR和菌液测序鉴定，鉴定正确后克隆转化到BL21（DE3）中，进行蛋

白表达及可溶性分析，同时用镍柱亲和层析法对其进行纯化。通过菌液PCR序列

鉴定，PA-X特有序列的原核表达载体序列正确，编码框正确。转化BL21后目的

蛋白表达成功，且大多数为可溶性蛋白。Westernblot结果表明制备的多克隆抗

体具有良好的免疫反应性。

【期刊名称】《中国动物传染病学报》

【年(卷),期】2016(024)001

【总页数】6页(P32-37)

【关键词】猪流感病毒;PA-X特有序列;原核表达;蛋白纯化;Westernblot

【作者】宫晓倩;郑浩;童光志;于海;阮宝阳;刘晓敏;张鹏;汪琪;汪秀会;周艳君;李泽君;

童武

【作者单位】中国农业科学院上海兽医研究所，上海200241;中国农业科学院上

海兽医研究所，上海200241;中国农业科学院上海兽医研究所，上海200241;中

国农业科学院上海兽医研究所，上海200241;中国农业科学院上海兽医研究所，

上海200241;山东农业大学动物科技学院，泰安271000;中国农业科学院上海兽

医研究所，上海200241;中国农业科学院上海兽医研究所，上海200241;山东农

业大学动物科技学院，泰安271000;中国农业科学