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蛋白表达及抗体制备流程图
构建蛋白原核表
达载体（带HIS
orGST接头）
重组质粒转入蛋
白表达菌株BL21
orER2566
转化菌株的小量
诱导表达
转化菌株的大量
诱导表达
珠子吸附纯化上清洗涤包涵体
蛋白复性
抗体的制备
抗血清的检
测
具体实验步骤
（一）蛋白原核表达载体的构建
蛋白原核表达载体一般带有HisorGST接头。构建载体时要确保读码框
的正确。
（二）重组质粒转入蛋白表达菌株BL21orER2566
转化方法同常规转化。
（三）转化菌株的小量诱导表达
(1)从转化的平板中挑取单菌落，接种于2mL含Amp的LB液体培养基中，37℃
振荡培养过夜；
（2）取100μl过夜培养的菌液接种于2mL含Amp的LB液体培养基中，37℃振
荡培养50min左右，使OD达到0.6-0.8；
600
(3)加入IPTG至0.5mM，37℃诱导培养4h；(注意设置不加IPTG的对照；一
般诱导条件为37℃诱导培养4h，但根据蛋白的不同，诱导温度和时间会有
所不同)；
(4)取1mL菌液，12000rpm离心10min，收集菌体；
(5)用100μLPBS悬浮菌体菌体，加入20μL6×SDS凝胶加样缓冲液，100℃
沸水浴10min；
(6)12000rpm离心10min，取菌体裂解液上清进行SDS。
（if经诱导的菌株有目的蛋白表达，则继续如下操作）
（7）以相同条件诱导并收集菌体（方法见1-4）；
（8）加入200μLPBS悬浮菌体；
（9）将浑浊的菌体悬浮液超声至变清(注意冰上操作)；
（10）12000rpm离心10min，取上清至另一干净EP管，即为上清管
（11）余下沉淀用100μLPBS悬浮，即为沉淀管（包涵体）；
（12）分别向上清管和沉淀管中加入6×SDS凝胶加样缓冲液，100℃沸水浴10
min；
（13）12000rpm离心10min，取上清管和沉淀管的上清进行SDS。
（if蛋白在上清或沉淀中有特异表达，则继续进行大量诱导表达）
（四）转化菌株的大量诱导表达
(1)挑取单菌落于5mL含Amp的LB液体培养基中，37℃振荡培养过夜；
(2)按1：1000的比例转接扩大培养，37℃振荡培养至OD达0.6-1.5左右（一
600
般250mLLB中加入5mL菌液，培养1h50min左右；最好摇500mL，以便有足
够的样品做后续实验）
(3)加入IPTG至0.5mM，37℃诱导4h（一般诱导条件同小量诱导；但根据蛋
白不同，有的诱导条件会有所不同。一般降低诱导温度，减少蛋白表达量可
能使蛋白在上清中表达；但大部分的蛋白是在包涵体中表达）；
（4）取1mL菌液，12000rmp离心10min；进行（三）（8）-（13）的操作；
（5）westernblot检测特异表达蛋白是否
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