分子生物学课件第七章-蛋白质的生物合成-翻译.ppt

第七章蛋白质的生物合成－翻译

Chapter7proteinbiosynthesis（translation）;一、遗传密码（geneticcodon）;1954，Gamov提出三联体密码子;他们的方法是:

(1)去模板：用DNAase处理E.coli抽提物，使DNA降解，除去原有的细菌模板。

(2)加入polU：合成了多聚苯丙氨酸

这一结果不仅证实了无细胞系统的成功，同时还表明UUU是苯丙氨酸的密码子。

分别加入polyA，polyC和polyG结果相应地获得了多聚赖氨酸，多聚脯氨酸和多聚甘氨酸。;(3)按比例加入２种核苷混合的多聚物

由于当时还未分离RNApol酶，无法按设计的模板来合成RNA，Nirenberg又想出了一种新的方法，就是按一定的碱基比例来合成RNA。

比如在底物中加5份的UDP和1份的GDP，

碱基比为U：G＝5：1，

它们能组成8种三联体：

UUU，UUG，UGU，GUU，

GGG，GGU，GUG，UGG。

U和G随机加入到三联体中，这样按比例各个位置上进入U和G的概率不同，如氨基酸测定结果：;如UUU：UGG＝（5?5?5）:（5?1?1）

＝25：1

同理UUU：UUG＝5：1，

根据检测结果推测:

苯丙氨酸（UUU）：半胱氨酸（UGU）

＝5：1

苯丙氨酸（UUU）：缬氨酸（GUU）

＝5：1

苯丙氨酸（UUU）：甘氨酸（GGU）

＝24：1

;核糖体结合实验;Date;以特定的共聚物为模板指导多肽的合成;Date;Ser丝氨酸;Thr苏氨酸;Tyr酪氨酸;Phe苯丙氨酸;起始密码(initiationcodon):AUG;遗传密码表;2、遗传密码的基本特征;（2）密码子的简并性;氨基酸密码子的简并性;（3）摆动性（wobble）;密码子、反密码子配对的摆动现象;三中读二一般可分为三种情况：

(1)第１,２两个碱基形成６个氢键时，可三中读二。

如CCX，CGＸ，GCX和GGX。

(2)第1,2两个碱基形成4个氢键时,不可三中读二。

如AAX，AUX，UAX和UUX。

(3)第1,２两个碱基形成５个氢键时,

当第二个碱基为嘧啶时，可三中读二；

如UCX，ACX，CUX和GUX。

当第二个碱基为嘌呤时则不能三中读二，

如CAX，GAX，UGX和AGX。;密码子的使用频率与tRNA的数量有关;CodonusageObservedforE.coliRibosomeProtein;CodonusageinthegenesofAnimals;（5）通用性和变异性;Codon;二、tRNA;TψC常由5bp的茎和7nt的环组成，此臂负责和核糖体上的rRNA识别结合；

反密码子环(anticodonloop)常由5bp的茎区和7Nt的环区组成，它负责对密码子的识别与配对。

D环(Dloop)的茎区长度常为4bp，也称双氢尿嘧啶环。负责和氨基酰tRNA聚合酶结合;

额外环(extraloop)可变性大，从4Nt到21Nt不等，其功能是在tRNA的L型三维结构中负责连接两个区域（D环－反密码子环和TψC-受体臂）。;---aaacceptarm;

loadingaaat3’end;tRNA的三级结构示意图(倒L形);2、氨基酸活化;（2）氨基酰tRNA合成酶(aminoacyl-tRNAsynthetase，AARS);（3）氨酰tRNA合成酶的鉴别功能

动力学校对（Kineticproofreading）

化学校对（Chemicalproofreading）;以aa为准校正tRNA;以tRNA为准校正aa;?

原核和真核生物核糖体的组成及功能

核糖体亚基rRNAs蛋白RNA的特异顺序和功能

细菌

70S50S23S=2904b31种(L1-L31）含CGAAC和GTψCG互补

2.5×106D5S=120b

66%RNA30S16S=1