DB14∕T 1942-2019 实验动物 中国地鼠微卫星DNA 检测方法.docx

ICS65.020.30B44

DB14

山西省地方标准

DB14/T1942—2019

实验动物中国地鼠微卫星DNA检测方法

LaboratoryanimalMethodformicrosatellitemarkersofChinesehamster

2019-12-01发布2020-02-01实施

山西省市场监督管理局发布

DB14/T1942—2019

I

目次

前言 II

1范围 1

2术语和定义 1

3抽样 1

4方法 2

DB14/T1942—2019

II

前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则编写。

本标准由山西省科学技术厅提出、归口并监督实施。本标准起草单位：山西医科大学。

本标准主要起草人：宋国华、刘田福、陈朝阳、高继萍、张锐虎、续国强。

DB14/T1942—2019

1

实验动物中国地鼠微卫星DNA检测方法

1范围

本标准规定了实验动物中国地鼠（以下简称实验中国地鼠）遗传检测抽样数量及微卫星DNA检测方法。

本标准适用于实验中国地鼠品系鉴别、质量控制及遗传组成分析。

2术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

2.1

实验中国地鼠laboratoryChinesehamster

指经人工饲育，对其携带的微生物和寄生虫实行控制，遗传背景明确或者来源清楚，用于科学研究、

教学、生产和检定以及其它科学实验的中国地鼠(Gricetulusgriseus)。

2.2

近交系中国地鼠inbredstrainChinesehamster

以全同胞或亲子交配方式繁殖20代以上的中国地鼠，近交系数达98.6%以上。

2.3

封闭群中国地鼠closedcolonyChinesehamster

以非近亲交配方式繁殖中国地鼠，在不从外部引入新个体的条件下，至少连续繁殖4代以上。

2.4

微卫星DNAmicrosatelliteDNA

是指基因组中由1～6个碱基组成的串联重复序列。不同个体的重复数不同而形成了微卫星DNA的多态性。

3抽样

对近交系中国地鼠抽样数量不做要求。每个封闭群随机抽取非同窝成年实验中国地鼠，雌雄各半。采样数量按表1进行。

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2

表1封闭群实验中国地鼠遗传检测抽样要求

群体数量（只）

抽样数量（只）

少于100

≥15

大于100

≥30

4方法

4.1采样

观察动物外观，核对编号，中国地鼠取0.5cm尾尖组织或眼眶静脉丛采血，-20℃低温保存。

4.2微卫星位点的选择

各微卫星位点的名称、引物序列、等位基因数、PCR反应的退火温度见表2。PCR引物的5’端用

FAM荧光染料进行标记。近交系中国地鼠在表2中选择10个微卫星位点，封闭群中国地鼠在表2中选择15个微卫星位点。

表2中国地鼠微卫星位点

位点

引物序列

退火温度(°C)

片段大小

最大等位基因数

Chm35

F:AGGCTGCTTCCTAAACCCAT

51

354-391

4

R:CTGGGAAGGCTGAACTCAAG

Chm93

F:TCTGTGTGTCTGTGAATGCG

58

242-299

7

R:GGATGTAAGATGGCTCCGAA

Chm147

F:CATCTGGGCTTTCAATGGAT

58

233-292

9

R:GCTCCCTAAATAACCCCCAA

Chm79

F:AGGGGAGATCTTGGGTCAGT

51

270-355

5

R:AACATGGAGGAGCACAAACC

Chm120

F:GATAGGAGGGAGCAAAAGGG

58

376-432

12

R:CCTGAGAGCCTCAGAGCAGT

Chm162

F:TCTTCCCTTCACAACCCAAG

58

167-214

12

R:AGCAGTGCCCTTTGAAACAT

Chm10

F:GGCTGGTGATTTCAATGGTT

59

217-357

5

DB14/T1942—2019

3

R:GTTCTTAATGGATCTACCCTGGGACC

Chm108

F:CAATGGCTGCTAAGAGAGGG

59

392-471

5

R:GTTCTTTCCCACTCACAATTTTCCTTG

Chm115

F:TACTCCTGTCTCCACCTCCC

59

17