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青风藤SaDBR2基因的克隆和表达
目录
一、内容概述................................................3
1.1研究背景与意义.......................................4
1.2研究目的与内容.......................................4
1.3技术路线与方法.......................................4
二、材料与方法..............................................5
2.1实验材料.............................................7
2.1.1青风藤组织样本...................................8
2.1.2基因克隆相关试剂.................................9
2.1.3转化与表达相关试剂...............................9
2.2实验方法............................................10
2.2.1样品制备........................................11
2.2.2基因克隆........................................12
2.2.3表达载体构建....................................12
2.2.4转化与表达......................................13
2.2.5结果检测........................................15
三、青风藤SaDBR2基因的克隆.................................16
3.1样品总RNA提取.......................................17
3.2cDNA第一链合成......................................17
3.3基因克隆............................................18
3.4验证克隆............................................19
四、青风藤SaDBR2基因的表达.................................20
4.1表达载体的构建......................................21
4.1.1启动子选择......................................21
4.1.2终止子选择......................................23
4.1.3其他元件添加....................................23
4.2转化与表达..........................................25
4.2.1转化方法........................................26
4.2.2表达载体转入青风藤细胞..........................27
4.3表达产物的检测......................................28
五、结果与分析.............................................29
5.1基因克隆结果........................................30
5.2表达载体构建结果....................................31
5.3转化与表达结果......................................32
5.4结果分析............................................33
六、讨论...................................................34
6.1基因克隆的策略与优化................................35
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