流感病毒的鸡胚培养,收获及血凝效价测定实验报告 .pdfVIP

篇一：鸡胚培养法

鸡胚

培养法（病毒分离培养）

鸡胚是发育的机体，适合许多人类和动物病毒及立克次体的生长增值，常用于痘类病毒、粘

液病毒、和疱疹病毒的分离、鉴定、抗原准备、疫苗生产以及病毒性质等方面的研究。鸡胚

培养病毒，常用的接种途径包括绒毛尿囊膜，尿囊腔、羊膜腔以及卵黄囊接种四种。根据不

同病毒，不同实验目的以及不同来源的标本，选择不同的途径接种鸡胚进行培养，即可达到

分离培养病毒和传代病毒的目的。本片主要介绍尿囊腔和羊膜腔两种接种途径在病毒分离培

养和传代中的应用。

鸡胚的接种方法、

孵育及收获

一、仪器和器材

spf鸡卵或鸡胚、

二级生物安全柜、孵卵箱或恒温箱、检卵灯、照蛋灯、开卵钻、卵盘、1ml、1次注射器、医

用胶布、液体石蜡、无菌镊子、巴氏吸管、15ml无菌离心管、试管架、96孔微量反应板、

加样槽、移液器、75%酒精、生理盐水等。

二、鸡胚的孵育

应选择保存温度在

100左右，时间不超过10天，卵壳薄而色浅的鸡卵，用于鸡胚的孵育。特别脏的鸡卵需用清

水清洗，用布擦干后孵育，干净的鸡卵不必做任何处理。将鸡卵置于380c390c孵卵箱，

在孵卵箱底层盛水器中放入干净自来水，以保证鸡胚发育的湿度，病保持良好的通风，孵育

至第四天，于检卵灯上检查鸡胚受精与否及发育情况。受精鸡卵可见清晰地血管小团和发育

的鸡胚迹象，似蜘蛛壮，未受精鸡卵仅能看见模糊的卵黄黑影，无鸡胚迹象。在孵育过程中，

应随时对鸡胚进行检查，淘汰濒死或已经死亡的鸡胚。若在恒温箱里孵育鸡胚，则应在恒温

箱底层放入装满水的广口容器，并从孵育的第3天起，每天180度转到鸡胚1—2次，是鸡胚

发育匀称。也可直接订购孵育9—11日龄的鸡胚。

如何判断鸡胚存活

状态：1胎动：于检卵灯下可见活胎有明显的自然运动，但胎龄大于14天的胚胎，胎动不明

显，甚至无胎动，死胎则无任何胎动，胎发红似出血样，有的呈现黑快。2血管：活胚可见

清晰地血管，卵壳较薄者还可见血管的搏动。死胎血管模糊，成淤血带或淤血块。3绒毛尿

囊膜发育界限：生活良好的胚胎可见密布血管的绒毛尿囊膜，与胚胎的另一面形成良好的界

限须将上面三个方面结合起来进行观察，如果胚胎活动呆滞或不能主动地运动，血管模

糊扩张，或折断沉落，绒毛尿囊界限模糊，则可判断胚胎濒死或已经死亡。

三、鸡胚接种（尿

囊腔）

（一）尿囊腔接种：

一般应用于流感病毒、新城鸡瘟病毒和腮腺炎病毒的适应、传代和病

毒量的扩增。病毒

在尿囊的内胚层细胞中繁殖，并释放到尿液中，因此，在尿囊液中含有大量病毒，可用血凝

实验来测定病毒的存在。1.接种方法及步骤：选择发育良好的9—11日龄鸡胚，用于尿囊腔

接种，在检卵器上画出鸡胚的气室边界及胎位，在胚胎面与气室交界边缘约1mm处避开血管

做一标记。此即为注射点，用酒精消毒，用开卵钻在注射点部位开一个约2mm的小孔，勿损

伤壳膜，用注射器注入：0.10.2ml接种物，用医用胶布将小孔封好，气室朝上置于卵架，

放入330c350c孵卵箱进行培养，孵育24小时后检视，弃去死胎，2收获：收获时间依据

不同病毒而异，